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动物福利:小鼠腹水产生指导原则

2017年03月01日 浏览量: 评论(0) 来源:https://oacu.oir.nih.gov/animal-research-advisory-committee-guidelines 作者:李晓菲译 责任编辑:admin
摘要:体外方法常用于生产单克隆抗体(mAb),除非有明确的科学原因,说明为什么他们不能使用或他们的使用产生的产品不合格。可接受的采用腹水方法的研究见于表一。描述体内替代物的参考文献可用单克隆抗体生产方法。如果小鼠腹水生产单克隆抗体的方法是必需的,每一个合理的努力,应尽量减少疼痛或痛苦,包括经常观察动物,限制存活的数量、腹壁穿刺,如果动物出现痛苦的迹象对其进行安乐死。IACUC的责任来确定是否需要使用动物进行试验。
体外方法常用于生产单克隆抗体(mAb),除非有明确的科学原因,说明为什么他们不能使用或他们的使用产生的产品不合格。可接受的采用腹水方法的研究见于表一。描述体内替代物的参考文献可用单克隆抗体生产方法。如果小鼠腹水生产单克隆抗体的方法是必需的,每一个合理的努力,应尽量减少疼痛或痛苦,包括经常观察动物,限制存活的数量、腹壁穿刺,如果动物出现痛苦的迹象对其进行安乐死。IACUC的责任来确定是否需要使用动物进行试验。
 
在审核涉及小鼠腹水方法的提案主要调查人员应考虑的具体准则是:
 
1、生物材料和动物产品,如引入研究动物体内的细胞系、组织和肿瘤物港动物病原体(如发,能激发如鼠痘、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎,小鼠肝炎及其他。主要调查人员负责确保在他们的研究中使用的生物材料不会危及使用活动物和在动物设施其他动物或工作人员的健康。引入动物宿主前,杂交瘤细胞必须用PCR或特异性抗体进行试验前测试,除非获得主任或设施兽医的批准。,在将杂交瘤用于动物实验之前,APD或其指定人必须审查和批准试验方案,包括考虑腹水生产的建议。几年前用不完全病原体进行的杂交瘤细胞测试,应重新进行测试。从其他研究机构或校园获得的杂交瘤细胞需经主任或其它使用人许可,这是因为不同的设施之间的健康状况变化,甚至在设施内从房间到房间。提醒:任何动物来源的产品,而不只是杂交瘤,引入动物必须得到批准。实验室人员必须时刻意识到实验室的操作可能会将感染剂传染给动物设施。例如:如果要对动物注射抗体或用于体外治疗体内转移的细胞,抗体/血清必须被确保不含感染剂。
 
2、腹水的产生需要使用"启动"剂。最常见的"启动"剂是姥鲛烷但在0.25或0.5ml弗氏不完全佐剂也被证明为有效剂量,可以产生卓越的结果。但动物已经表达了潜在的不适和痛苦,可能是"启动"药物有关,特别是姥鲛烷。由于这种影响,许多指南建议使用0.1到0.2ml的姥鲛烷剂量而不是更高的0.5ml。因此,强烈鼓励使用较低剂量。然而,类似的报告指出,"在一些品系的小鼠,0.2ml可能不足以产生腹水,可能需要高达0.5ml。
 
3、杂交瘤细胞接种数量和接种量一般范围为105 - 107,细胞体积为0.1 - 0.5ml,但可能与杂交瘤系不同。启动和杂交瘤细胞接种标准之间的时间间隔为启动后10-14天。一般而言,高的细胞数诱发高的发病率,小于1*105细胞数目能诱发较少的腹水肿瘤。
 
4、一旦注射杂交瘤细胞,应至少每天一次进行动物的监测,每周七天由熟悉腹水产生症状的人员观察。
 
5、腹部扩张前应减轻腹水压力造成的不适或干扰的正常活动。手动限制或麻醉可进行腹腔穿刺术。由经过培训的熟练人员采用无菌针头进行。尽可能使用最小的针(18-22计)。液体应缓慢地经带有流速的针管流出,而不是使用吸气注射器。
 
6、 动物在吸取腹水的过程中应监测几个小时,防止休克的发生。动物应该继续至少每天监测一次,每周七天由熟悉与腹水生产,循环休克,疼痛和痛苦临床症状的人员观察。苍白的眼睛,耳朵、鼻部和呼吸困难预示着循环休克。用生理盐水替代去除的液体来预防和治疗休克。腹腔途径注射2-3ml生理盐水,剩余体积经皮下途径给予。痛苦或疼痛迹象可能包括驼背姿势,毛发粗糙,减少食物消耗、体重减轻、消瘦,不愿活动,难以行走,呼吸问题以及可触及的实体肿瘤生长。在出现出血穿刺疼痛或窘迫前动物应被执行安乐死。动物穿刺管的数量应该是有限的,最多三根。额外的穿刺应经IACUC批准。
 

表一 使用腹水方法的科学原因举例

a

杂交瘤细胞株不适应在体外培养条件下

b

注射到小鼠体内的几个不同的小鼠单克隆抗体高浓度应用程序是必需的

,体外方法是低效的

c

在小鼠体内使用单克隆抗体,小鼠腹水单抗可能对实验是必不可少的

d

大鼠杂交瘤细胞株用于大鼠不产生有效的腹水,通常在体外条件下适应能力差,在免疫力低下的小鼠上产生腹水

e

下游纯化可导致蛋白质变性和抗体活性下降。

f

无血清或低血清条件不能提供足够数量的单克隆抗体,例如对感染性生物的新疫苗的评价。

g

培养方法有时产生IgG单克隆抗体是糖基化的与小鼠腹水液手机不同的部位从而影响抗原结合能力与重要生物学功能。

h

当杂交瘤细胞产生的单克隆抗体与感染性物质污染,如酵母或真菌,细胞通常必须通过小鼠。

i

有些细胞系不适应组织培养条件,无法生产足够单克隆抗体

 

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