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实验猪模型:对反复视网膜下手术和视网膜下萘烷的去除有很好的耐受性

2017年12月13日 浏览量: 评论(0) 来源:Graefe's Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology September 2017, Volume 255, Issue 9, pp 1749–1756 | Cite as 作者:李晓菲译 责任编辑:admin
摘要:视网膜下全氟萘烷(PFCL)是视网膜脱离修复后发生的一种严重并发症。可以手术去除全氟萘烷(PFCL),但对视网膜的损伤还未知。此外,由于对视网膜下操作越来越有兴趣使其重复操作检查视网膜的功能和形态。我们假设,在猪模型的视网膜下腔注射PFCL,然后用对视网膜结构和功能损伤最少的方法移除。
摘要:视网膜下全氟萘烷(PFCL)是视网膜脱离修复后发生的一种严重并发症。可以手术去除全氟萘烷(PFCL),但对视网膜的损伤还未知。此外,由于对视网膜下操作越来越有兴趣使其重复操作检查视网膜的功能和形态。我们假设,在猪模型的视网膜下腔注射PFCL,然后用对视网膜结构和功能损伤最少的方法移除。
 
方法:对十只健康的三个月龄雌性猪的左眼进行了观察。多焦视网膜电图(mfERG)进行术前记录。玻璃体切割术后,使用41g套管将PFCL注入视网膜下。14天后,使用注射器和将萘烷去除。去除2周后,多焦视网膜电图(mfERG)进行记录,后对猪进行安乐死,取眼部组织进行形态学观察。
 
结果:多焦视网膜电图的振幅比(左/右眼)基线和去除萘烷两周后结果无显著性差异。二阶(M =−0.18,SD = 0.86,P = 0.57),直接反应(M = 0.39,SD = 0.61,P = 0.12)或诱发成分(M =−0.03,SD = 0.40,P = 0.80)。组织学上,光感受器外节受影响最小。去除萘烷14天后视网膜恢复正常。四头猪视网膜下萘烷向下移位不容易去除。
 
结论:14天视网膜下萘烷可以被去除,对视网膜没有持久的损伤,萘烷是一种重液,位移的风险很高。进一步实验使用PFCLs控制实验性视网膜脱离的持续时间。
 
关键词:机器人手术 视网膜色素上皮细胞 视网膜脱离 视网膜下间隙
 
简介:人类眼内手术常见的并发症是视网膜下的全氟化碳液体沉积(PFCLs)。萘烷是一种常用的PFCL,在玻璃体手术中常用于稳定视网膜。一旦萘烷进入视网膜下腔,大小变化仍然不明显。视网膜下萘烷可以通过视网膜切开术和常规抽油泵被移除。也可以用一根钝的倾斜21针来进行人工抽吸。目前还不清楚去除萘烷如何影响视网膜的结构和功能。此外讨论萘烷的眼内毒性。兔视网膜下萘烷致严重视网膜变性、坏死、空泡形成,晚期损伤光感受器细胞核内、外节。此外,加入萘烷致培养的人RPE细胞活性降低。去除萘烷后细胞的增殖恢复正常。短期的视网膜下,黄斑外存在萘烷似乎并不影响视力。视网膜下手术需求的增加,如细胞移植、基因治疗、长效药物。调查反复进入实验模型视网膜下腔对视网膜结构和功能的影响是有必要的。当需要时视网膜下液体可以别移除有助于视网膜脱离的研究。视网膜脱离研究的一个问题是分离时间难以控制。乳酸林格液可以短期分离视网膜,但视网膜自发复位。已获得长期的视网膜分离无复位的经验。Healon手术是具有挑战性的,因为它需要一个高流量转向分散凝聚力,用注射器去除必要的粘度。如此高的流量可能会损害视网膜。PFCLs如萘烷作为一种替代的占据空间的物质诱导视网膜分离。低粘度便于显微外科器械注入和抽吸。其他能够分离视网膜的实验模型是干性AMD和视网膜下移植的RPE萎缩的研究。早期的研究强调了光感受器和布鲁赫膜分离的重要点为胶质增生发生的地区缺乏视网膜色素上皮(RPE)细胞。在这项研究中,我们评估重复视网膜下手术和视网膜下萘烷沉积结构和功能的影响,此外,我们探讨了视网膜下注射和脱萘烷技术。
 
方法:研究选用10头雄性猪,重约30kg,六头猪按计划完成了研究。一头猪因胃部感染和高烧对抗生素没有反应而被排除和处死,4头猪萘烷下沉,在去除萘烷的时间点没有停留在视觉条纹区。
 
麻醉:麻醉前18小时,动物禁食,但可以自由饮水。动物使用舒泰预麻醉,联合使用0.4%盐酸奥布卡因、10%盐酸去氧肾上腺素、0.5%托吡卡胺和1%硫酸阿托品使右眼瞳孔扩大到大于8mm。猪气管内插管和人工通气。人工通风采用0.5升/分钟100%氧气和2.5升/分钟空气。保持每搏输出量(10毫升/千克)呼吸频率(16/分钟)不变。猪被静脉注射丙泊酚15 mg/kg(10毫克/毫升)麻醉。猪都静脉注射氯化钠(9毫克/毫升),体温保持在38–39°C。监测心率、心电图、二氧化碳和氧饱和度。
 
基线mfERG和外科手术:充分麻醉的动物获得基线mfERG。在巩膜的10、2、5方向和角膜缘后2mm获取mfERG记录。手术过程中补液,使用21G玻璃体切割探头移除后玻璃体。将萘烷注入视网膜下接近视神经上方的视网膜血管。一个41g / 0.1毫米BSS注射针产生长时间的视网膜脱离。通过调节萘烷注射量(200–300μL)放大到所需的大小。缝合巩膜和结膜,并局部应用1%氯霉素软膏。术后2周,根据之前描述的方法去除萘烷。
 
跟踪操作:去除萘烷二周后,麻醉动物,使用神经肌肉阻滞剂避免眼睛运动。静脉注射4mg阿屈库铵; 扩张的眼睛适应房间光15分钟,在标准照明条件下记录mfERG。参考电极置于耳后,动物和所有电气设备均接地。监测眼球运动。使用间接检眼镜对所有动物进行眼底检查并拍照。静脉注射5μg/kg的芬太尼,并摘取左眼球。并使用1ml/kg的戊巴比妥钠对猪进行安乐死。
 
组织学:去除眼前段和晶状体,将眼后端固定于4%多聚甲醛。根据标准程序确定含有视盘和外科病变的段,分离,石蜡包埋。对5μm的切片用光学显微镜(LM)检查。组织学检查眼底血管、血管交叉和视神经。所有组织学切片均根据外核层、感光层(PR)、光感受器外段(OS)和视网膜色素上皮(RPE)的外观进行全面检查和分级。分级包括:0 =正常情况,1,层影响;2,层退化;3 ,无视网膜组织的最大损伤。标本同时检测残余萘烷和脉络膜新生血管。其中0 =不存在, 1 =存在。在同一组织学标本中,在视觉处理区和未处理区计数神经节细胞。从每个组织标本中,获得两个数字图像,一个来自处理区,另一个来自未处理区域。
 
结果:去除萘烷14天后视网膜功能正常:十萘烷去除两周后,mfERG振幅复位视网膜区域记录均正常。,术前和去除萘烷14天左、右眼mfERG无显著差异。
 
视网膜状态与萘烷存在与否无关:七只眼中有六只眼(感光度)受影响(1级),其中1只眼有视网膜色素上皮层(1级),2只眼有CNV。处理区神经节细胞平均数为25.43细胞,未处理区平均数为23.57细胞。处理组与未处理区神经节细胞层细胞数无显著性差异。眼底照片的色素减退区作为视网膜色素上皮损害的标志。所有猪均发现局部色素减退区。七只猪中的一只,视网膜色素上皮损伤覆盖了整个分离区。
 
结论:重复手术进入视网膜下腔,短期萘烷影响极小。建议是14天内去除视网膜下腔的萘烷。
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