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猴免疫缺陷病毒抗体免疫梳检测方法的建立及应用

2018年06月28日 浏览量: 评论(0) 来源:中国实验动物学报2018年第2期 作者:李丹丹 王绥家 陈平亚 张体银 杨俊兴 刘忠梅 高慎阳 责任编辑:admin
摘要:以基因工程技术制备猴免疫缺陷病毒(SIV)的 SIV30蛋白作为抗原诊断试剂,建立免疫梳方法(IC)用于特异性检测实验猴血清中抗SIV的抗体IgG。

目的:  以基因工程技术制备猴免疫缺陷病毒(SIV) SIV30蛋白作为抗原诊断试剂,建立免疫梳方法(IC)用于特异性检测实验猴血清中抗SIV的抗体IgG

方法:  应用原核表达载体pGEX-4T-1构建SIV SIV30 基因的重组表达质粒,并在感受态细胞BL21中表达,将该重组蛋白纯化后作为诊断抗原,建立免疫梳标准化检测程序,并应用于临床检测。

结果:  最佳抗原包被量为0.02mg/mL;制备好的IC均能够特异性检测到相应的SIV阳性血清而不与其他病毒血清间发生交叉反应,表明该检测方法特异性强;敏感性分析结果表明,SIV30蛋白能够敏感地检测到1∶400倍稀释的SIV阳性血清;稳定性和重复性试验结果表明,同一样品重复检测3,变异系数(CV) 均小于10%;利用该检测方法在对10份可疑猴血清样品进行检测,ICELISA检测结果一致率为100.0%,Kappa =1000

结论:  原核表达了SIV30蛋白,制备了IC,并应用于临床检测。 该检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,具有良好的实用性。 

全文阅读:猴免疫缺陷病毒抗体免疫梳检测方法的建立及应用

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