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实验动物常见支原体荧光定量PCR检测方法建立

2020年10月27日 浏览量: 评论(0) 来源:实验动物科学2019年第5期 作者:辛闻婷 杨媛媛 王馨宇 吴东 李灵恩 责任编辑:admin
摘要:建立能对实验动物常见支原体进行检测的荧光定量PCR方法。

目的  建立能对实验动物常见支原体进行检测的荧光定量PCR方法。


方法  针对多种大、小鼠易感支原体的16 s rRNA基因中较保守的区域设计1对引物和探针,建立荧光定量 PCR方法并检测其特异性、灵敏性及重复性。


结果 该方法在模板浓度为5×100-5×106copies/μL之间呈良好的线性关系(R²=0.9972)且扩增效率为98.11%;特异性强,能够区分检测金黄色葡萄球菌等常见的病原菌;灵敏性高,检测下限为5copies/μL.比常规PCR的检测灵敏性高100倍;重复性好,对不同浓度模板进行组内和组间重复性试验的变异系数均低于2%。用荧光定量PCR和普通PCR方法对不同来源不同类型的120份临床样品进行检测,结果表明小鼠支原体检测阳性率分别为3.33%(2/60)、1.67%(1/60),细胞样品支原体检测阳性率均为5%(3/60)。


结论  本研究建立的荧光定量PCR方法快速、特异强、灵敏性高、重复性好,可用于实验动物常见支原体的快速诊断。


阅读原文:实验动物常见支原体荧光定量PCR检测方法建立.pdf


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