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    合欢皮对小鼠的抗焦虑作用研究-续

    • 创建时间:2015-04-03 点击数:

    内容

    合欢皮对小鼠的抗焦虑作用研究-续

    实验三 合欢皮醇提液对焦虑小鼠的行为学影响

    1 实验材料

    1.1 实验药品

    合欢皮:豆科植物合欢 Silktree Albizia Bark 的干燥树皮,原产地:湖北,规格:选,产品批号:121228,经河南中医学院生药学教授陈随清教授鉴定确认。质量标准符合《中国药典》2010 年版一部对合欢皮质量要求。

    地西泮片:购自河南中医学院第三附属医院,天津力生制药股份有限公司,

    规格:2.5mg。产品批号:1304006

    乙醇:天津市恒兴化学试剂制造有限公司。

    1.2 实验动物

    KM 小鼠,SPF 级,体重 20±2g,雄性。购自郑州大学医学院动物实验中心,许可证号:SCXK(豫)2010-0002,质量证号:NO.41003100000236。分笼饲养于动物实验中心,温度 20±2℃。

    1.3 主要仪器

    GZX-9070 MBE 电热鼓风干燥箱:上海博迅实业有限公司医疗设备厂;

    ZDHW 型调温电热套:河北省黄骅市中兴仪器有限公司;

    HH-6 数显恒温水浴锅:上海比朗仪器有限公司;

    EYELAN-1100旋转蒸发仪:上海爱朗仪器有限公司;

    SHZ-D(Ⅲ)型循环水式真空泵:巩义市英峪予华仪器厂;

    DZF-6020 型真空干燥箱:上海精宏实验设备有限公司;

    EL-S 电子天平:常州市天之平仪器设备有限公司;

    XR-XB120小鼠明暗箱装置:上海欣软信息科技有限公司;

    XR-XG201 高架十字迷宫装置:上海欣软信息科技有限公司;

    2 实验方法

    2.1 药物制备

    取 60g 合欢皮粉碎,加 80%乙醇,回流提取 2 次,每次 1h,过滤,合并滤液,浓缩挥干至无醇味浸膏,减压干燥至粉末,加水溶解配制成所需浓度。

    2.1 分组与给药

    SPF 级别小鼠 60 只,体重体重 20±2g,雄性,不限食水喂养适应环境喂养 3天,第四天称重编号,按随机分组软件随机分为五组,每组 12 只,分别为焦虑模型组,阳性给药组,合欢皮醇提液高、中,低剂量组,

    模型组:ig 蒸馏水

    阳性组:ig 地西泮水溶液(2.5mg/kg)

    合欢皮醇提液高剂量组:ig 合欢皮醇提液(0.0633g/kg)

    合欢皮醇提液中剂量组:ig 合欢皮醇提液(0.0315g/kg)

    合欢皮醇提液低剂量组:ig 合欢皮醇提液(0.0153g/kg)

    每天上午 8:30ig 给药,给药体积 0.1ml/10g,连续 ig 给药 5d.

    2.2 行为学实验

    2.2.1 高架十字迷宫实验

    Ig 给药第 5d,按日常灌胃顺序,每 5min 给药,给药 0.5h 后进行高架十字迷宫实验。实验前先将小鼠置于开场中活动 5min,然后将小鼠置于迷宫中央,使其头部正对其中一个开放臂,用计算机跟踪记录小鼠在高架十字迷宫上的活动情况,记录时间为 5min。以小鼠开放臂进入次数百分比(OE%)即开放臂进入次数/(开放臂进入次数+封闭臂进入次数)和开放臂滞留时间百分比(OT%)即开放臂滞留时间/(开放臂滞留时间+封闭臂滞留时间)作为评价药物抗焦虑作用的指标。

    2.2.2 明暗箱实验

    高架十字迷宫实验结束后立即进行明暗箱实验,先使其自由活动 5min,然后将小鼠背对暗室置于明室中央,观察记录 10min 内小鼠在明暗箱内的穿箱次数(TT),以此作为评价药物抗焦虑作用的指标。整个实验过程中注意保持实验环境的安静和实验装置的清洁从而减少外界环境对实验结果的影响。

    2.3 统计学方法

    采用 SPSS17.0 软件进行单因素方差分析,实验数据以(x—±s)表示;以 P<0.05为差异具有显著性。

     

    3 结果

    由表 1 和图 1 可以看出,与焦虑模型组比较,阳性地西泮组在开臂滞留时间百分比(%)(OT%)和开臂进入次数百分比(%)(OE%)上均有显著性差异( P<0.05),说明焦虑模型造模成功,与焦虑模型组比较,合欢皮醇提液中剂量组能增加焦虑小鼠开臂滞留时间,其余组在开臂滞留时间百分比(%)(OT%),开臂进入次数百分比(%)(OE%)及穿箱次数(次)(TT)上均显示出有一定的势,无显著性差异。

    4 小结

    由以上结果可以看出,仅合欢皮醇提液中剂量组在开臂滞留时间百分比(%)(OT%)与焦虑模型组比较显示出一定的显著性差异(P<0.05),其余组并未表现出显著性差异,合欢皮醇提液中剂量组可能有一定的抗焦虑作用,总体上合欢皮醇提液未显示出有抗焦虑作用。

     

    实验四 合欢皮抗焦虑活性部位的初步筛选研究

    1 实验材料

    1.1 实验药品及试剂

    合欢皮:豆科植物合欢 Silktree Albizia Bark 的干燥树皮,原产地:湖北,规格:选,产品批号:121228,经河南中医学院生药学教授陈随清教授鉴定确认。

    地西泮片:购自河南中医学院第三附属医院,天津力生制药股份有限公司,规格:2.5mg。产品批号:1304006

    氯仿:天津市登科化学试剂有限公司

    乙酸乙酯:天津市登科化学试剂有限公司

    正丁醇:天津市登科化学试剂有限公司

    乙醇:天津市登科化学试剂有限公司

    1.2 实验动物

    KM 小鼠,SPF 级,体重 20±2g,雄性。购自郑州大学医学院动物实验中心,许可证号:SCXK(豫)2010-0002,质量证号:NO.41003100000236。分笼饲养于动物实验中心,温度 20±2℃。

    1.3 主要仪器

    GZX-9070 MBE 电热鼓风干燥箱:上海博迅实业有限公司医疗设备厂;

    ZDHW 型调温电热套:河北省黄骅市中兴仪器有限公司;

    HH-6 数显恒温水浴锅:上海比朗仪器有限公司;

    EYELAN-1100旋转蒸发仪:上海爱朗仪器有限公司;

    SHZ-D(Ⅲ)型循环水式真空泵:巩义市英峪予华仪器厂;

    DZF-6020 型真空干燥箱:上海精宏实验设备有限公司;

    EL-S 电子天平:常州市天之平仪器设备有限公司;

    XR-XB120小鼠明暗箱装置:上海欣软信息科技有限公司;

    XR-XG201 高架十字迷宫装置:上海欣软信息科技有限公司;

    TGL-16gR 型高速冷冻离心机:上海安亭科学仪器厂;

    JY92-Ⅱ超声波细胞粉碎机:宁波新芝生物科技股份有限公司;

    微量移液器:北京大龙兴创实验仪器有限公司;

    酶免仪(680 Microplate Reader,Bio-Rad Laboratories);

    γ-氨基丁酸(GABA)检测试剂盒(由 R&D 生产,批号 20131101A);

    谷氨酸( Glu)检测试剂盒(由 R&D 生产,批号 20131101A);

    五羟色胺(5-HT)检测试剂盒(由 R&D 生产,批号 20131101A)。

    氯化钠注射液:河南双鹤华利药业有限公司,产品批号:A12032601

    全自动雪花制冰机:常熟仪器设备厂

    分液漏斗;回流提取装置

    2 实验方法

    2.1 样品制备

    2.1.1 合欢皮水提物及其各萃取部位的制备

    取合欢皮(粗粉)50g 水提 2 次,1h/次,趁热过滤,合并滤液,减压浓缩至100ml,将浓缩液平均分为两份,一份作为合欢皮水提物供药理实验,另一份依次用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取,所得萃取液减压浓缩至浸膏,各加水 50ml得合欢皮水提物的氯仿萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物药液,备用

    2.1.2 合欢皮醇提物及其各萃取部位的制备

    取合欢皮(粗粉)50g 用 95%乙醇回流提取 2 次,1h/次,趁热过滤,合并滤液,减压浓缩至浸膏并挥至无醇味,取干燥浸膏分成两份,分别加水 50ml,一份作为合欢皮醇提液,另一份依次用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取,所得萃取液减压浓缩至浸膏,各加水 50ml 得合欢皮醇提物的氯仿萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物药液,备用。

    2.1.3 分组与给药

    SPF 级别小鼠 100 只,体重体重 20±2g,雄性,不限食水喂养适应环境喂养3 天,第四天称重编号,按随机分组软件随机分为 10 组,每组 10 只,分别给药。连续给药 5d。

    焦虑模型组:ig 蒸馏水

    阳性组:ig 地西泮水溶液(2.5mg/kg)

    合欢皮水提液组:ig 合欢皮水提液(2.5g/kg)30

    合欢皮水提液氯仿萃取物组:ig 合欢皮水提液氯仿萃取物(0.024g/kg)

    合欢皮水提液乙酸乙酯萃取物组:ig 合欢皮水提液乙酸乙酯萃取物(0.025g/kg)

    合欢皮水提液正丁醇萃取物组:ig 合欢皮水提液正丁醇萃取物(0.11g/kg)

    合欢皮醇提物组:ig 合欢皮醇提物(0.0315g/kg)

    合欢皮醇提物氯仿萃取组:ig 合欢皮醇提物氯仿萃取物(0.017g/kg)

    合欢皮醇提物乙酸乙酯萃取组:ig 合欢皮醇提物乙酸乙酯物(0.084g/kg)

    合欢皮醇提物正丁醇萃取组:ig 合欢皮醇提物正丁醇物(0.16g/kg)

    2.2 行为学实验

    2.2.1 高架十字迷宫实验

    Ig 给药第 5d,按日常灌胃顺序,每 5min 给药,给药 0.5h 后进行高架十字迷宫实验。实验前先将小鼠置于开场中活动 5min,然后将小鼠置于迷宫中央,使其头部正对其中一个开臂,用计算机跟踪记录小鼠在高架十字迷宫上的活动情况,记录时间为 5min。以小鼠开臂进入次数百分比(OE%)即开臂进入次数/(开臂进入次数+封臂进入次数)和开臂滞留时间百分比(OT%)即开臂滞留时间/(开臂滞留时间+封臂滞留时间)作为评价药物抗焦虑作用的指标。

    2.2.2 明暗箱实验

    高架十字迷宫实验结束后立即进行明暗箱实验,先使其自由活动 5min,然后将小鼠背对暗箱置于明箱中央,观察记录 10min 内小鼠在明暗箱内的穿箱次数(TT),以此作为评价药物抗焦虑作用的指标。整个实验过程中注意保持实验环境的安静和实验装置的清洁从而减少外界环境对实验结果的影响。

    2.2.3 小鼠行为学实验结束后,立即断头处死于低温下迅速取全脑,用万分之一天平精密称重,以脑组织(g):生理盐水(mL)=1:10 的比例加入低温的生理盐水,低温下用超声细胞粉碎机进行匀浆,匀浆液在 4℃,8000r/min 条件下离心 10min,取上清液置 5mL 离心管中,即得浓度为 10%的小鼠脑匀浆液,取脑匀浆液进行酶联免疫吸附法,分别测定脑组织中 GABA、Glu 和 5-HT 的含量,具体操作严格按照试剂盒说明进行。试剂盒具体操作方法见实验二。结果判断:31绘制标准曲线:在 Excel 工作表中,以标准品浓度作为横坐标,对应吸光度OD 值作为纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按线性回归曲线方程计算各样本浓度值。最终样本浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数以 GABA 标准品浓度作横坐标,对应 OD 值作纵坐标,绘制标准品线性回归曲线,得曲线方程 A=0.1866C+0.1279(R2=0.9929),表明浓度在 0μmol/L~8μmol/L 范围内,浓度与 OD 值呈现良好的线性关系。

    以 Glu 标准品浓度作横坐标,对应 OD 值作纵坐标,绘制标准品线性回归曲线,得曲线方程 A=0.0348C+0.1352(R2=0.9936),表明浓度在 0mg/L~48mg/L 范围内,浓度与 OD 值呈现良好的线性关系。

    以 5-HT 标准品浓度作横坐标,对应 OD 值作纵坐标,绘制标准品线性回归曲线,得曲线方程A=0.0123C+0.0833(R2=0.9925),表明浓度在 0ng/mL~120ng/mL范围内,浓度与 OD 值呈现良好的线性关系。

    2.3 统计学方法

    采用 SPSS17.0 软件进行单因素方差分析,实验数据以(x—±s)表示;以 P<0.05为差异具有显著性 

    3 结果

    3.1 合欢皮不同活性部位对焦虑小鼠行为学影响 

    通过表 1 及图 1 可以看出,与焦虑模型组比较,阳性地西泮组能增加焦虑小鼠开臂滞留时间百分比(%)(OT%),开臂进入次数百分比(%)(OE%)及穿箱次数(次)(TT)。说明焦虑模型造模成功,在开臂滞留时间百分比(%)(OT%)上,与焦虑模型组比较,阳性组、合欢皮水提液组、水提乙酸乙酯组、水提正丁醇组、合欢皮醇提物组、合欢皮醇提物正丁醇萃取物组均有显著性差异(P<0.05);在开臂进入次数百分比(%)(OE%)上,与焦虑模型组比较,阳性组、合欢皮水提液组、合欢皮水提正丁醇萃取组、合欢皮醇提正丁醇萃取组均有显著性差异(P<0.05);在穿箱次数(次)(TT)上,与焦虑模型组比较,仅阳性药物组有显著性差异(P<0.05)。由此可以看出阳性组、合欢皮水提液组、合欢皮水提正丁醇萃取组、合欢皮醇提正丁醇组有一定的抗焦虑作用。

    3.2 合欢皮抗焦虑活性部位对行为学实验小鼠脑内 GABA、Glu、5-HT 含量的影响

    从表 1 及图 1、2、3 中可以看出,与焦虑模型组比较,阳性组、合欢皮水提液组、合欢皮水提正丁醇部位、合欢皮醇提正丁醇部位均可提高小鼠脑内 GABA含量,降低小鼠脑内 Glu 含量,降低小鼠脑内 5-HT 含量,其抗焦虑作用机制可能与其降低小鼠脑内Glu、5-HT 含量,提高小鼠脑内 GABA 含量有关。

    4 小结

    从实验结果可以得知,合欢皮水提液组有抗焦虑作用,这验证了实验一及实验二的实验结果,合欢皮水提正丁醇萃取物组与合欢皮醇提正丁醇萃取物组均有抗焦虑作用,可以说明合欢皮抗焦虑有效部位为正丁醇部位。

    实验五 合欢皮正丁醇部位木酯素含量测定

    1 仪器与试药

    1.1 主要仪器

    Waters e2695 型高效液相色谱仪:美国;

    Waters 2489 UV/Visible Detector:美国;

    KQ3200B 超声波清洗器:昆山市超声仪器有限公司;

    启天 M7300 工作站:联想公司;

    十万分之一天平:上海海康电子仪器厂;

    Acculab 电子天平:德国赛多利斯科学仪器有限公司

    SZ-93 自动双重蒸馏水:上海银泽仪器设备有限公司;

    1.2 主要试剂

    合欢皮对照品:(-)-丁香树脂酚-4-O-β-D 呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡

    萄糖苷,136997-64-3,四川维克奇公司。

    合欢皮正丁醇部位

    乙腈:Dikma 公司,色谱纯

    甲醇:天津市凯通化学试剂有限公司,分析纯

    磷酸:天津市登科化学试剂有限公司,色谱纯

    双蒸水:实验室自制

    2 方法与结果

    2.1 对照品溶液的制备:用十万分之一天平精密称取对照 20µg 置于 10ml 容量瓶中,加入 50%甲醇溶解,定容,摇匀,备用。

    2.2 供试品溶液的制备 分别取合欢皮水提液和醇提液正丁醇粉末0.25g,精密称定,置于具塞锥形瓶中,精密加入 50%甲醇 20ml,密塞,称定重量,浸泡 1 小时,超声处理(功率 250w,频率 40kHz)30 分钟,放冷,在称定重量,用 50%甲醇补足够、减失的重量,摇匀,滤过,经 0.45µm 微孔滤膜过滤,取续滤液备用,即得。

    2.3 色谱条件:色谱柱 Symmetry○R C18(4.6 mm×250mm,5.0μm),流动相:乙腈-0.04%磷酸水溶液(18:82),流速为 1ml·min-1, 柱温 30℃,分析时间 40min。

    2.4 标准曲线的绘制:按照上述色谱条件,取对照品溶液分别进样 2,4,6,8,10ul,以峰面积为纵坐标,进样量为横坐标,得到标准曲线,其回归方程:Y=42812X-2316 r=0.9998,线性范围为 0.06-1.06µg。

    2.5 精密度试验 取对照品溶液,重复进样 5 次,每次 20ul,测得 SAG 的峰面积,计算 RSD 为 1.3%,说明仪器精密度较好。

    2.6 稳定性试验 取同一份供试品溶液分别在 0,2,4, 8,12h 进样 20ul,在上述色谱条件下进行分析测定,计算含量的 RSD 为 1.5%,结果表明供试品溶液在 48h内稳定性良好。

    2.7 样品含量测定结果 经计算醇提正丁醇中(-)-丁香树脂酚-4-O-β-D 呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷含量为 0.025%,水提正丁醇中(-)-丁香树脂酚-4-O-β-D 呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷为 0.015%合欢皮水提液醇提正丁醇及水提正丁醇中均含有(-)-丁香树脂酚-4-O-β-D呋喃芹糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷。木酯素在醇提正丁醇部位中含量高于水提正丁醇部位。

    讨论

    1.合欢皮对焦虑小鼠行为学的影响

    本文先从合欢皮水提液进行抗焦虑研究实验,实验结果表明合欢皮水提液(2.5g/kg)对焦虑小鼠行为学有明显的干预作用,合欢皮水提液(2.5mg/kg)有一定的抗焦虑作用,合欢皮的醇提液经过多次调整剂量及多次抗焦虑小鼠行为学实验,未发现合欢皮醇提液具有抗焦虑作用,表明合欢皮抗焦虑有效部位可能在水溶性部位里,将合欢皮水提液和醇提物分别经氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取,将萃取物分别进行抗焦虑行为学实验,发现合欢皮水提液正丁醇萃取物及合欢皮醇提物正丁醇萃取物均有较好的抗焦虑作用,合欢皮抗焦虑的有效部位为正丁醇部位,通过对小鼠脑内递质含量的测定,发现其抗焦虑作用与提高小鼠脑内 GABA含量,降低小鼠脑内 Glu、5-HT 含量有关。合欢皮的正丁醇部位主要为木酯素类物质,有报道表明其木酯素类成分为合欢皮镇静安神的主要成分,由此未来可以在已经证明其正丁醇部位为有效活性部位的基础上进行进一步的研究,在分离得到的正丁醇部位可以采用硅胶色谱法将其分离,在分离得到的物质上继续进行抗焦虑行为学实验,进一步明确合欢皮抗焦虑的有效部位。

    2.西医学对焦虑症的认识

    焦虑症(Anxiety)又称焦虑性神经官能症,是以广泛和持续发作性焦虑或反复发作性惊恐不安为主要特征的神经性障碍,常伴有自主神经紊乱及运动性不安的病症。根据临床表现将其分为广泛性焦虑(GAD)和惊恐障碍(PD)两种主要形式。

    焦虑症患者常伴有头晕、胸闷、心悸、呼吸急促、口干、出汗等植物神经症状和运动性紧张。焦虑症的发生与多种因素有关,其生化机制与去甲肾上腺素、多巴胺、5——羟色胺、GABA 等多种递质系统有关。

    3.中医对于焦虑症的认识

    中医中并不存在“焦虑症”的说法,从临床症状上来看,焦虑症属于情志病、心病。可能与中医所说的“郁证”、“惊”、“恐”、“惊悸”、“怔忡”、“不寐”、“脏燥”、“百合病”等病症相似。基于中医的诊治整体观和辩证施治原则,临床上焦虑症通常辩证分型治疗,中医认为,临床焦虑症有多种辩证分型,按病程可分为肝气郁结型,气郁化火型、痰热上扰型、心脾两虚型、心神不宁型等。

    对于中医辨证分型中的心神不宁型焦虑症,可选用安神类的中药如酸枣仁、合欢皮、远志等或复方或单方进行治疗,合欢皮为豆科植物合欢 Albizzia julibrissinDurazz.的树皮,别名合昏皮(《备急千金药方》)、夜合皮(《独行方》)、合欢木皮(《本草纲目》)。合欢皮入药始载于《神农本草经》。《中国药典》2010 版一部记载合欢皮性平味甘,归心、肝、肺经。解郁安神,活血消肿,可用于心神不安忧郁失眠,肺痈、疮肿,跌扑伤痛。

    4.焦虑动物模型与合欢皮抗焦虑药效学观察

    高架十字迷宫装置和明暗箱装置是目前行为学实验公认的焦虑造模实验装置。小鼠在高架十字迷宫装置中会出现紧张、担心、恐惧或发作性惊恐等种种焦虑行为,实验指标以进入开臂次数百分比(OE%)(进入开臂次数/进入开臂膀次数+进入闭臂次数)、开臂滞留时间百分比(OT%)(开臂滞留时间/开臂滞留时间+闭臂滞留时间)来反映动物的焦虑状态,当小鼠放入高架十字迷宫和明暗箱时,焦虑小鼠的 OE%和 OT%明显降低,经典抗焦虑药物地西泮则使两者升高,通过实验我们发现合欢皮水提液(2.5g/kg)、合欢皮水提液正丁醇萃取物(0.11g/kg)和合欢皮醇提物正丁醇萃取物(0.16g/kg)显示出与地西泮相似的作用,表现出较好的抗焦虑作用,明暗箱模型以明箱中的亮光作为刺激源,由于小鼠本身具有趋暗的习性,小鼠本能情况下的条件反射是向暗箱中爬行,当它被置于明箱中时,会表现出明显的焦虑神经症的症状。小鼠在正常情况下更倾向于在暗箱一侧活动,但是当小鼠焦虑症状减轻时,由于小鼠本身具有一定的对未知的探索性和好奇性,就会增加在明暗箱两侧来回穿梭次数以及在明箱一边探寻行为的次数,用此来评价实验动物焦虑的程度。小鼠在明暗箱中穿梭次数越多,在明箱一侧探寻次数越多,抗焦虑的效果越好。在本文章三次小鼠抗焦虑行为学实验中,明暗箱的穿箱次数(TT)显示的效果不如高架十字迷宫 OE%和 OT%的效果好,可能与明暗箱是实验室自制的,需要靠人工来记录穿梭次数存在一定的人为误差有关。在未来的进一步的抗焦虑实验中如果能将明暗箱更换为可自动记录穿梭次数的设置,明暗箱的实验效果可能会更好。也能更加均衡的反应药物的抗焦虑效果,在实验的实际操作中存在这样的问题,有时在一次实验中可能存在极少数小鼠进入高架十字迷宫及明暗箱中完全没有反应,在处理数据中时摒除了这部分明显不43正常的数据,对实验数据的均衡可能存在部分的误差。在进一步的实验中,可考虑引入如开场实验等摒除部分明显不正常的小鼠。避免对实验产生误差。

    5.抗焦虑作用机制探究

    脑内存在的氨基酸,不仅是合成多种蛋白质的原料,同时还具有突触传递功能。谷氨酸(Glu) 属于兴奋性氨基酸,在中枢兴奋性氨基酸中占主导地位;γ-氨基丁酸(GABA)属于抑制性氨基酸,是中枢神经系统的主要抑制性神经递质。在中枢神经系统中,最重要的抑制性氨基酸是 γ-氨基丁酸,其在脑组织内广泛存在。GABA 与 Glu 是两种作用几乎完全相反的神经递质,但在代谢途径上却具有相关性,GABA 是 Glu 在谷氨酸脱梭酶(GAD)的催化下脱梭而成的,对 Glu 的释放又可呈负反馈的抑制作用。40%以上的抑制性神经传导由 GABA介导,GABA 可能通过激活受体而对离子通道构成影响,造成突触后膜超级化,抑制突触后电位产生,抑制神经元放电,从而发挥抗焦虑作用,因此 GABA 在控制神经元兴奋性方面,起着非常重要的作用。5-羟色胺(5-HT)广泛存在于哺乳动物组织中,特别在大脑皮层及神经突触内含量很高,属于生物原胺类神经递质,是调节神经活动的一种重要物质。中枢 5-HT 系统功能失调会导致抑郁、焦虑、惊恐、强迫等多种精神障碍。

    结 论

    1.以合欢皮中木酯素含量为指标,合欢皮水提液最佳工艺为 10 倍量的水,提取 2 次,每次 1.5h。

    2.合欢皮水提液有明显的抗焦虑作用,其抗焦虑作用机制与降低小鼠脑Glu、5-HT 含量,提高脑内 GABA 含量有关。

    3.合欢皮醇提液抗焦虑作用效果不佳。

    4.合欢皮正丁醇部位有明显的抗焦虑作用,其抗焦虑作用机制与降低小鼠脑Glu、5-HT 含量,提高脑内 GABA 含量有关。木酯素类化合物可能为其抗焦虑有效成分。