Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫法探讨化风丹对大鼠空间记忆能力的影响

内容

Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫法探讨化风丹对大鼠空间记忆能力的影响　　

摘要：目的：比较万胜化风丹、廖元和堂化风丹、氯化汞（ＨｇＣｌ２）和亚砷酸钠（ＮａＡｓＯ２）对健康ＳＤ大鼠空间记忆能力的影响。方法：清洁级ＳＤ 大鼠每天分别喂食万胜化风丹（４２０ｍｇ·ｋｇ－１，含汞１０．９ｍｇ·ｋｇ－１，含砷８．８ｍｇ·ｋｇ－１）、廖元和堂化风丹（４２０ｍｇ·ｋｇ－１，含汞１０．９ｍｇ·ｋｇ－１，含砷８．８ｍｇ·ｋｇ－１）、ＨｇＣｌ＼－２（５ｍｇ·ｋｇ－１，含汞３．７ｇ·ｋｇ－１）、ＮａＡｓＯ＼－２（５ｍｇ·ｋｇ－１，含砷２．９ｍｇ·ｋｇ－１）以及空白对照组，持续６０天，使用Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫（ＭＷＭ）法检测其空间学习能力。结果：用药前大鼠潜伏期在第１～４天无明显变化，训练第５天各组潜伏期显著下降；用药后训练第１～５天各组潜伏期呈明显下降趋势。与正常组比较，用药前各组在第１～５天均无显著差异，用药后ＨｇＣｌ２组在第２～５天均有显著性差异（Ｐ＜０．０５），万胜化风丹组、廖元和堂化风丹组及去 ＮａＡｓＯ２组仅在第４天差异显著（Ｐ＜０．０５）；与 ＨｇＣｌ２组比较，用药前各组在第１～５天均无显著差异，用药后万胜化风丹组、廖元和堂化风丹组和ＮａＡｓＯ２组在第２～５天均差异显著（Ｐ＜０．０５）。结论：ＨｇＣｌ２长期应用可显著降低大鼠中枢神经系统的空间记忆能力，化风丹对此无明显影响。　　

关键词：万胜化风丹；廖元和堂化风丹；ＨｇＣｌ２；ＮａＡｓＯ２；Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫　　

　　　　

化风丹是受国务院保护的四大名药之一，由药母、麝香、天麻、僵蚕、全蝎、雄黄、朱砂等１５味名贵中药材配伍经过独特的下窖发酵及风干工艺制作而成，主治风痰闭阻（头痛、耳鸣、脑动脉硬化、肢体麻木无力及脑萎缩）、癫痫、中风偏瘫、面神经麻痹等，是世界上生产及销售时间最长的治疗脑部疾病的中成药。化风丹中含矿物药朱砂和雄黄，是其治疗脑部疾病产生药理作用的重要成分。然而，朱砂、雄黄各自的主要成分ＨｇＳ、α－Ａｓ４Ｓ４是国际公认毒物汞、砷元素的化合物，其安全性问题深受国内外关注。由化风丹主治病症可知，神经系统是其发挥药效的重要靶器官，对于这方面的研究，目前少有相关报道。本研究从长期用药角度，给予大鼠喂食临床等效剂量万胜化风丹、廖元和堂化风丹和去朱砂化风丹６０天，观察其与ＨｇＣｌ２、ＮａＡｓＯ２对大鼠空间记忆能力影响的异同。　　

Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫（ＭＷＭ）是英国心理学家Ｍｏｒｒｉｓ于２０世纪８０年代初设计的，用于研究实验室大鼠空间学习与记忆能力以及评价神经递质系统、药物作用之间的关系的装置，在当代神经科学研究中占据十分重要的位置。目前，有相当多的试验者利用水迷宫来评价动物的学习与记忆能力，最常 用 的 评 价 指 标 是 定 位 航 行 实 验 的 “逃 避 潜 伏期”。另外，我们采用每天第１次训练的成绩作为评价指标，这样反映出的是大鼠对前一天的记忆力。　　

１　材料和方法　　

１．１　动物及分组　　

健康清洁级ＳＤ大鼠，雄性，１６０～２００ｇ，清洁级，购自重庆滕鑫比尔实验动物销售有限公司，动物许可证号ＳＣＸＫ（渝）２００７－０００５。大鼠在实验环境中适应性常规喂养３ｄ，保证大鼠每天充足的饲料和饮水，光照１２ｈ。筛选出达到学习标准的大鼠３０只，将其随机分为５组（ｎ＝６）为万胜化风丹组（万胜组）、廖元和堂化风丹组（廖元和堂组）、ＨｇＣｌ２组、ＮａＡｓＯ２组和对照组。　　

１．２　主要药品　　

廖元和堂化风丹购自贵州廖元和堂药业公司，批号１２０３１５；万胜化风丹购自贵阳万胜药业有限责任公司，批号１２０３０７；ＨｇＣｌ２购 自 贵 州 省 万 山 特 区 矿 产 公 司，批 号１１１０００３；ＮａＡｓＯ２购自山东西亚化学工业有限公司，批号２０１３０３０１。　　

１．３　主要仪器　　

Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫由ABS工程塑料（汽车、飞机外壳材质）模具制作，保温系数相较铁皮材质高出数倍，不存在长时间使用生锈的问题、可移动平台和图像 自 动 采 集、处 理 系 统 等 组 成。水 池 直 径１５０ｃｍ，高７０ｃｍ；平台直径１５ｃｍ，高４０ｃｍ；水池四个象限有不同符号的导航标识。　　

１．４　定位航行试验　　

定位航行实验是通过大鼠在水中寻找平台的逃避潜伏期来检测大鼠学习能力的，方法如下：（１）将大鼠头朝池壁放入水中，放入位置取第二象限起始位置。记录动物找到水下平台的时间（ｓ），即逃逸潜伏期。在前几次训练中，如果这个时间超过９０ｓ，则引导动物到平台，在平台上停留３０ｓ。（２）将大鼠移开，放在１５０Ｗ的白炽灯下５ｍｉｎ，放回笼内。１只动物每天训练２次，上午、下午各１次，连续训练５ｄ，并记录训练成绩。　　

１．５　统计学分析　　

实验数据以（珚ｘ±ｓ）表示，应用ＳＰＳＳ１７．０统计软件中单因素方差分析进行统计分析，α＝０．０５水平检验。　　

２　结果　　

２．１　一般情况观察　　

各给药组大鼠每日食量、饮水量以及排便均未发现异常，毛色柔顺有光泽，体重稳定上升，各给药组无显著性差异，实验过程中无死亡。　　

２．２　定位航行试验　　

用药前大鼠潜伏期在第１天至第４天无明显变化，训练第５天各组潜伏期显著下降；用药后训练第１～５天各组潜伏期呈明显的下降趋势，且万胜化风丹组、廖元和堂化风丹组、ＮａＡｓＯ２组以及正常组在第２～５天与用药前比较均具有显著性差异（Ｐ＜０．０５）（见表２～５），ＨｇＣｌ２组仅在第４天与用药前比较有显著性差异（Ｐ＜０．０５）（见表４）；与正常组比较，用药前各组在第１～５天均无显著差异，用药后ＨｇＣｌ２组在第２～５天均有显著性差异（Ｐ＜０．０５）（见表２～５），万胜化风丹组、廖元和堂化风丹组和ＮａＡｓＯ２仅在第４天差异显著（Ｐ＜０．０５）（见表４）；与ＨｇＣｌ２组比较，用药前各组在第１～５天均无显著差异，用药后万胜化风丹组、廖元和堂化风丹组和ＮａＡｓＯ２组在第２～５天均差异显著（Ｐ＜０．０５）（见表２～５）。　　

３　讨论　　

用药前，各组大鼠每天训练的潜伏期无显著差异，即各组大鼠在用药前的空间记忆能力相当，表明筛选方式是正确且成功的，这为后期实验的顺利进行奠定了坚实的基础。　　

３．１　大鼠用药前后每天训练结果差异讨论　　

与用药前训练成绩比较，用药后各组大鼠的潜伏期均有明显的下降趋势，表明大鼠在喂养６０天后，经过１天的适应性训练，对给药前的训练结果具备一定程度的远期记忆能力。而ＨｇＣｌ２组大鼠的这一能力与其他组比较并不显著，从这一角度来看，ＨｇＣｌ２的长期应用减弱了大鼠的空间记忆能力。　　

３．２　大鼠用药后每天各组训练结果差异讨论　　

用药后，正常组大鼠每天训练的潜伏期呈显著下降趋势，万胜组、廖元和堂组和ＮａＡｓＯ２组与正常组的趋势相同，且无显著性差异，表明两种化风丹和ＮａＡｓＯ２对大鼠空间记忆能力无明显影响。而ＨｇＣｌ２组在第２～５天的潜伏期均显著高于正常组及其他给药组，提示ＨｇＣｌ２的长期应用可减弱大鼠的空间记忆能力。　　

综上所述，ＨｇＣｌ２的长期应用对中枢神经系统的空间记忆能力具有显著的影响，这主是由于ＨｇＣｌ２是无机汞，与朱砂中主要成分ＨｇＳ存在形式不同，导致其对脑组织的不同影响。　　

　 　

　 　

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