UBC9介导SUMO化修饰在同型半胱氨酸诱导巨噬细胞焦亡中的作用研究
目的 探讨泛素结合酶 9(ubiquitin conjugating enzyme 9,UBC9)介导 SUMO 化修饰在同型半胱氨酸 诱导巨噬细胞焦亡中的作用。
方法 首先采用细胞计数试剂( cell counting kit-8,CCK-8)法和 Western blot 检测不 同浓度(0 μmol / L、50 μmol / L、100 μmol / L、150 μmol / L 和 200 μmol / L)同型半胱氨酸对小鼠巨噬细胞(RAW264. 7) 的活力及焦亡的影响;采用 Western blot 检测不同组细胞中 UBC9、SUMO 化修饰蛋白 SUMO-1、炎症因子 IL-1β 的表 达水平;qRT-PCR 检测干扰前后 UBC9 的 mRNA 表达,同时检测干扰 UBC9 后,UBC9、焦亡相关蛋白、IL-1β 及 SUMO-1 相关表达。
结果 当采用 100 μmol / L 的 Hcy 刺激后,巨噬细胞的活力影响最小且焦亡蛋白 NLRP3、 Caspase-1 表达最明显(P<0. 001);与 Control 组相比,Hcy 组 IL-1β 的表达水平升高(P<0. 01),SUMO-1 表达升高(P <0. 01);与 Control 组相比,Hcy 组中 UBC9 蛋白水平及 mRNA 水平表达均增高(P<0. 05);转染 si-UBC9 后,与 si-NC +Hcy 组相比,si-UBC9+Hcy 组 NLRP3、Caspase-1、IL-1β、UBC9、SUMO-1 表达降低(P<0. 01)。
结论 同型半胱氨酸 诱导巨噬细胞焦亡的发生,其机制与上调泛素结合酶 9 发生 SUMO 化修饰有关。
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