小鼠自身溶血性贫血模型
1.造模材料 动物:SD大鼠体重约120g,雄性,C57BL/6J小鼠、BALB/c小鼠,雌雄不限,约6周龄,体重18~20g,家兔,体重2.5kg,雄性;药物:纯化小鼠1g,卡介苗,雷怕霉素(rapamycin, RPM),环孢素(cyclosporin, CsA),盐酸苯肼。
2.造模方法
(1)小鼠自身溶血性贫血模型的建立:取SD大鼠心脏血,经洗涤后配成1×10的9次方个/ml红细胞悬液,取0.2ml免疫小鼠腹腔注射,每周1次,共4次。每次免疫前从眼眶后静脉丛取血,用Coomb血清检测抗自身红细胞抗体产生及其滴度,用血凝试验检测小鼠血清中抗大鼠红细胞抗体度。
(2)Coombs血清的制备:先用卡介苗10mg/只预激活,10天后,用完全福氏佐剂与等量小鼠Ig溶液(1.5mg/ml)混合进行初次免疫,第35天再用小鼠Ig溶液1.5mg/ml加强免疫,1周后放血,用Coombs试验测抗体效价,合格后放血,分离血清,分装,-20℃保存。
(3)将模型组小鼠分别在第1、4、7天进行皮下注射,首次剂量为0.08ml/10g,后两次减半。
3.造模原理 自身溶血性贫血是一种器官特异性自身免疫病,用糖皮质激素和环孢素仅使80%左右病例的症状得到缓解。新型免疫抑制剂雷帕霉素(RPM)是一种化学结构与FK506相似的大环内酯类抗真菌抗生素,体内外实验均表现了其很强的免疫抑制作用。
4.造模后生化变化
(1)对C57BL/6J小鼠产生抗自身红细胞抗体的影响:模型组造模7天C57BL/6J小鼠的Coombs滴度为(6.57±0.53)log2a、14天Coombs滴度为(5.86±3.63)log2a、21天Coombs滴度为(9.71±3.68)log2a、28天Coombs滴度为(18.0±2.94)log2a、35天 Coombs滴度为(15.57±2.70)log2a。
(2)对BALB/c小鼠抗自身红细胞抗体的影响:模型组造模7天BALB/c小鼠的 Coombs滴度为(4.38±0.52)log2a、14天Coombs滴度为(13.0±0.00)log2a、21天 Coombs滴度为(17.13±1.73)log2a、28天Coombs滴度为(15.57±1.16)log2a。
(3)对BALB/c小鼠产生抗大鼠红细胞抗体的影响:模型组造模7天BALB/c小鼠的 Coombs滴度为(4.71±0.49)log2a、14天Coombs滴度为(6.67±2.66)log2a、21天 Coombs滴度为(11.67±3.44)log2a、28天Coombs滴度为(15.0±1.26)log2a,35天 Coombs滴度为(13.6±1.03)log2a。
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