1.造模材料  动物：新西兰大耳白家兔，体重2.5～3.0kg，雌雄各半，Wistar大鼠，体重230～270g于实验室(室温18～25℃)适应一周后开始实验。全自动冷冻机。循环式自动控温(±1℃)全自动冷冻机，电子显微镜。药物：70％乙醇，95％乙醇。

2.造模方法

(1)冻伤前将兔右后足充分剪毛，在平第四趾骨粗隆处画一浸冻线，用70％乙醇局部消毒，在掌面由浸冻线中点上方插入装有热电偶针头，沿皮下行至Ⅱ、Ⅲ趾关节交界处。将兔足浸于冷冻液中(95％乙醇)，液面平浸冻线。Ⅰ～Ⅲ度冻伤分别在-10℃中浸冻8、10、15min，Ⅳ度冻伤在-20℃中浸冻时间为：当组织温度降至-5℃时再继续浸冻10min。浸冻后在25℃室温下自然复温，用无菌纱布包扎。

于冻伤后12、24、48、72h分别活取病理组织，取未冻伤侧作为自身正常对照。取材部位为动物冻足中心、足底中部的皮肤和肌肉，常规电镜制样，CH10型透射电镜观察。

(2)大鼠乙醚麻醉后将双后肢置于-20℃的95％乙醇循环冷冻槽中致组织冻结10min，立即在20℃水中复温至接近水温取出。

3.造模后病理变化  兔足Ⅰ～Ⅳ度冻伤后不同时间皮肤的超微结构的变化：在轻度冻伤(Ⅰ～Ⅱ度)中，可见到早期12～24h时，间质水肿较明显，原纤维细胞变长。到48～72h时，少数上皮间质变性，部分上皮细胞有退行性变。偶见原纤维细胞内的线粒体个别区有空化；在重度冻伤(Ⅲ～Ⅳ度)中，随着冻伤后时间的延长，其超微结构改变也加重。12～24h时，上皮细胞开始有不规则的排列，间质水肿，线粒体大小分布有不一致的地方。48～72h时，上皮细胞排列紊乱，仅见细胞轮廓，细胞器极少，有少量线粒体，线粒体大片空化。轻度冻伤与重度冻伤比较其改变有明显差异。

兔足Ⅰ～Ⅳ度冻伤后不同时间肌肉的超微结构的变化：在轻度(Ⅰ～Ⅱ度)冻伤中，12～24h时，肌纤维间有水肿，但Z线、H带清楚，肌膜完整，接近正常图像；48～72h时，肌间水肿明显，有的肌束有退行性改变，个别肌束的Z线、H带不清，偶见线粒体空化、肌丝紊乱。在重度冻伤(Ⅲ～Ⅳ度)中，12～24h时肌肉超微结构稍有改变，肌纤维束排列基本整齐，肌间水肿，Z线、H带部分区域结构不清，线粒体偶见空化；48～72h时，肌肉的超微结构改变明显，肌纤维束排列紊乱、断裂，Z线、H带结构不清，线粒体空化。重度冻伤比轻度冻伤改变明显。