目的 miR-207 在许多疾病中存在差异性表达,探究 miR-207 过表达对调控结核分枝杆菌(H37Ra) 在巨噬细胞内存活的机制研究,为结核病的靶向治疗提供理论基础。

方法 将实验分为 4 组:空白组(Ana-1 细 胞)、对照组(感染 H37Ra 的细胞)、mi 组(感染 H37Ra 并转染 miRNA-207 mimics)和 mi-NC 组(感染 H37Ra 并转染 mimics NC)。 使用 H37Ra 感染 Ana-1 细胞建立结核感染模型,使用脂质体转染法将 miRNA-207 mimics 和 mimics NC 转入 Ana-1 细胞。 结核菌落形成单位计数评估 miR-207 对胞内分枝杆菌负荷的影响以及对胞外残留分枝杆菌 的清除作用。 采用流式细胞术检测细胞总凋亡率。 实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测 miR-207、细胞凋亡基 因、焦亡基因、炎症基因及自噬基因相对表达量。 Western blot 检测细胞凋亡蛋白、焦亡蛋白、自噬蛋白的相对表达 量。 采用荧光显微镜及多功能酶标仪检测细胞内 ROS 的荧光强度,以及检测细胞内 LDH 的含量。

结果 显微镜 下观察成功建立感染模型,qPCR 检测发现对照组 miR-207 表达量低于空白组(P<0. 01),表明 miR-207 在空白组和 对照组中差异性表达,mi 组 miR-207 表达量显著高于 mi-NC 组(P<0. 0001),表明成功建立转染模型。 菌落形成单 位计数发现 mi 组的菌落数高于 mi-NC 组和对照组(P<0. 001)。 流式细胞术检测发现 mi 组总凋亡高于 mi-NC 组和 对照组(P<0. 05)。 qPCR 及 Western blot 检测发现对照组凋亡基因和凋亡蛋白相对表达量高于空白组(P<0. 05), mi 组高于 mi-NC 组(P< 0. 05)。 对照组炎症基因相对表达量高于空白组( P< 0. 001),mi 组高于 mi-NC 组( P< 0. 05),对照组焦亡基因和焦亡蛋白相对表达量高于空白组(P<0. 01),mi 组高于 mi-NC 组(P<0. 05)。 自噬正调节 基因 LC3 和 Beclin1 在对照组的相对表达量高于空白组(P<0. 0001),mi 组低于 mi-NC 组(P<0. 05)。 负调节自噬 基因相对表达量与自噬正调节基因趋势相反。 自噬相关蛋白相对表达量与自噬基因趋势一致。 ROS 荧光强度检 测发现对照组的荧光强度高于空白组(P<0. 05),mi 组高于 mi-NC 组(P<0. 001)。 LDH 检测发现对照组细胞内 LDH 含量高于空白组(P<0. 01),mi 组与 mi-NC 组含量无统计学意义(P>0. 05)。

结论 miR-207 过表达促进细胞 凋亡、细胞焦亡及炎症、抑制自噬,有利于 H37Ra 的存活,为结核病的治疗提供新的方向。

阅读原文：miR-207调控结核分枝杆菌在巨噬细胞内存活的机制研究.pdf