目的 以人卵巢颗粒肿瘤细胞为模型,探究特异性顶部盘状底板反应蛋白 2(RSPO2)对卵巢颗粒细 胞氧化应激和凋亡的影响。

方法 在 COV434 细胞中瞬时转染 RSPO2 过表达质粒和小干扰 RNA( siRNA),实时荧 光定量 PCR(qPCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测过表达和干扰效率,利用活性氧检测试剂盒测定细胞内活 性氧含量,流式细胞术检测凋亡水平,qPCR、Western blot 测定氧化应激和凋亡相关基因表达量,免疫共沉淀检测互 作蛋白。

结果 成功实现 RSPO2 的过表达和干扰。 过表达 RSPO2 显著抑制颗粒细胞内活性氧的水平(P<0. 05), 极显著抑制颗粒细胞早期凋亡(P<0. 01),干扰 RSPO2 可得到相反的试验结果。 过表达 RSPO2 能显著上调 SOD1、 SOD2、CAT mRNA 和蛋白表达水平(P< 0. 05),显著下调 Caspase 3、Caspase 8 表达水平(P< 0. 05)。 相反,干扰 RSPO2 显著下调 SOD1、CAT 表达水平(P<0. 05),显著上调 Caspase 3、Caspase 8 表达水平(P<0. 05),并发现 RSPO2 和 SOD1、CAT、Caspase 3 存在明显的蛋白互作现象。

结论 干扰 RSPO2 促进细胞内活性氧的积累,下调 SOD1 和 CAT 的表达,从而促进氧化应激;干扰 RSPO2 上调 Caspase 3 和 Caspase 8 的表达,促进细胞的凋亡,提示 RSPO2 在 卵巢颗粒细胞中发挥着重要的作用。

阅读原文：RSPO2对卵巢颗粒细胞氧化应激和凋亡的影响.pdf