目的 应用免疫印记实验(Western blot)评价急性高原缺氧诱导肺损伤模型组织和细胞的内 参蛋白变化及选择。

方法 本文应用 C57BL / 6J 小鼠置于低压低氧大舱模拟 6000 m 海拔进行缺氧 8 h、24 h 和 72 h 建立高原肺损伤模型,苏木素-伊红(HE)染色明确高原肺损伤模型的成功建立;Western blot 检测内参 蛋白粘着斑蛋白(vinculin)、α 微管蛋白(α-tubulin)、真核翻译起始因子 5(eukaryotic translation initiation factor 5,EIF5)、β 肌动蛋白(β-actin)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)的 表达,并应用考马斯亮蓝染色检测总蛋白的表达。 体外实验应用支气管上皮细胞( bronchial epithelial cell, BEAS-2B)和内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)进行缺氧诱导损伤模型的建立,TUNEL 染色明确细胞损伤模型的成功建立;Western blot 检测不同内参蛋白表达,并应用考马斯亮蓝染色检测总蛋白 的表达。

结果 在成功建立急性高原缺氧 8 h、24 h 和 72 h 模型的基础上,总蛋白表达量一致,内参蛋白 vinculin、α-tubulin、EIF5 和 β-actin 表达量一致,GAPDH 表达量在低压低氧 8 h、24 h 和 72 h 组较常氧组升高, 其中低压低氧 72 h 组表达量较常氧组显著升高。 在成功建立 BEAS-2B 和 HUVECS 缺氧 8 h、24 h 和 48 h 的 基础上,总蛋白表达量一致,BEAS-2B 内参蛋白 β-actin 和 GAPDH 和常氧组表达量一致,在缺氧 24 h 组 vinculin、α-tubulin、EIF5 较常氧组表达明显下降;HUVCES 内参蛋白 vinculin 和 α-tubulin 和常氧组表达量一 致,在缺氧 8 h 后 EIF5、β-actin 和 GAPDH 较常氧组表达明显下降,缺氧 48 h 后表达增高。

结论 急性高原缺 氧诱导肺组织损伤,进行 Western blot 时内参蛋白 vinculin、α-tubulin、EIF5 和 β-actin 的表达稳定,可作为内参 选择;体外应用肺组织最主要的 BEAS-2B 和 HUVECS 等细胞诱导缺氧损伤模型,Western blot 检测内参蛋白 vinculin、α-tubulin、EIF5、β-actin、GAPDH 的表达量在缺氧后皆有所变化,选择总蛋白作为内参更为合适。

阅读原文：不同内参蛋白在急性高原缺氧诱导肺损伤中的表达变化及选择.pdf