1.造模材料  动物：昆明种小鼠，雌性或雄性，体重30～40g。猫，犬。

2.造模方法

(1)采用昆明种雌鼠、雄鼠比例为2：1进行交配，4天后取出雄鼠。对模型组进行恐吓造模，实验时，直接将鼠笼置于猫笼下，中间仅隔一层铁丝网，猫有时可触及到鼠，每天恐吓2次，上、下午各2小时，共恐吓14天，直到生产前。

(2)小鼠到75日龄时，随机分为恐吓组与对照组2组，每组12只雌鼠，按雌、雄2：1交配。第4天晚取出雄鼠，第5天在另一实验室对实验鼠进行恐吓，将孕鼠直接置于猫笼之下，猫笼与鼠笼仅一网之隔，猫爪可触及雌鼠，雌鼠惊恐不已，缩在角落，不吃不喝。每天上午、下午各恐吓2h，即9：00～11：00，15：00～17：00，共14天，直至孕鼠分娩前1天为止。增加恐吓的氛围。

(3)以“猫吓鼠”、“人吓猫”、“爆竹吓犬”的方式将猫与鼠关在套笼中以网隔开，距离控制猫可将小鼠从笼中抓出吃掉。强度4小时/天，持续7天，或24小时/天，持续14天。在每日上、下午用活鼠喂猫各一次。人吓猫，2次/天，0.5小时/天，持续30天；爆竹吓犬，在前后左右四周木板上均钉有长锐钉(钉间距10cm)的木圈里放入犬，每只犬固定于只能伸头转身的木圈里，每天放1次300响鞭炮，持续30天。

(4)吊尾荡水惊恐应激模型：悬吊尾下为荡漾的水面，使其鼻尖近水面，每日上下午各悬吊30min，其间穿插15min猫叫录音，造成惊恐应激肾虚模型，共16天。

3.造模原理  就遗传而论，中医“肾”的本质主要指本能行为(肾藏志的一个基本内容)和遗传物质(即狭义之精)。恐吓母代，可通过“恐伤肾”，造成下一代的先天肾虚，可表现出本能行为异常的宏观表征和遗传物质变化的微观表征。根据情志可以致病，惊恐伤肾的理论。

4.造模后一般变化  实验动物出现惊恐，后转为适应或木僵。体重减轻或增长缓慢。小鼠显得十分恐慌，全身颤抖，继而缩在鼠笼角落里，不敢睁眼，几乎没有活动，大小便明显增加。

5.造模后生化变化

(1)行为遗传测试方法：初生鼠翻身测试：对初生鼠当天就做翻身测试。方法是将初生鼠四脚朝天，背置实验台，观察30s内能四脚着地为翻身成功，否则为失败。成年鼠取食芝麻测试：将91天龄的子代鼠饥饿15h，分2次置于放有72粒黑芝麻的白色塑料盒中，计算7min内所吃芝麻的数量(包括整粒和部分被食的芝麻)。第1次测试未插入猫叫，第2次测试时同时播放其母亲造模时猫叫的录音。对照组成功率为43.6％±6.68％，模型组为24.1％±8.23％，与对照组比较，模型组呈现显著性差异。

(2)DNA、RNA测试：对初生鼠当天随机取2/3，断头处死，立即取出脑组织，剥离胸腺。胸腺制成匀浆，用二苯胺法和地衣酚法测定DNA、RNA的含量；胆碱酯酶(AchE)活性测定。对照组子代初生鼠胸腺DNA、RNA含量(μg/g)及脑组织AchE活性分别为5.34±2.08、6.47±2.52、655.35±50.28；模型组分别为2.25±0.31、1.67±0.58、392.33±90.61。与模型组比较DNA、RNA，胆碱酯酶呈显著性变化。

6.造模后病理变化

(1)对子代雄鼠右睾丸进行HE染色观察：恐吓组生精细胞的间质内多数水肿明显，有的生精细胞浆内疏松肿胀，有的伴胞浆内大小不等的空泡形成。在曲细精管管腔内精子生成减少(与对照组比较)。生精细胞的层数恐吓层平均约为6.0层，对照组平均为4.5层，虽有差别，但无统计学的意义。子代雄鼠睾丸在880μm内生精细胞数对照组18.8±4.1、模型组为29.4±3.63。

(2)冷冻60天后，对子代鼠的睾丸，再置于10％甲醛溶液中浸泡31天，后作HE染色后光镜下观察：恐吓组曲细精管中生精细胞层数4～6层，生精细胞排列不整齐，分布多少不匀，生精细胞的间质内明显水肿，并见生精细胞胞浆多数有空泡变性。半数周界不清，还在曲细精管管胞内出现少量散在巨噬细胞，个别形成多核巨细胞，管腔内精子生成明显减少，且分布不均。非恐吓组所生小鼠睾丸光镜下见到曲细精管中生精细胞层数5～7层，排列不整齐，生精细胞分布不均，但比恐吓组为好。生精细胞无明显空泡变性，周界较轻；管腔内精子生成较多，未见巨噬细胞。

(3)以垂体-性腺轴改变为主的病理观察：小鼠睾丸包膜完整，体积略小，曲细精管上皮腐脱，结构紊乱，细胞空泡变性，见有巨噬细胞形成和伊红小滴出现，部分间质水肿及纤维化形成。睾丸生精上皮细胞结构松散，细胞内空泡变性，间质细胞胞浆内线粒体变性，脂质减少。脑垂体LH细胞胞浆内质网扩张，产生空泡，线粒体肿胀变性，细胞核分叶及核溶。肾上腺超微结构无明显病变。小鼠吊应激后学习记忆能力下降，雄性性功能减退，雌性性周期紊乱，肾上腺重量增加。猫睾丸精曲小管上皮腐脱及结构紊乱严重，上皮层次减少，管腔内成熟精子数量减少，见巨噬细胞形成，上皮细胞内有较多空泡形成及细胞脱失，精曲小管腔缩小，生精上皮层次减少。肝线粒体及肾上腺VitC染色无明显改变。睾丸精曲小管上皮腐脱结构紊乱，成熟精子减少，生精细胞内形成空泡，间质轻度水肿。

7.注意事项  动物应精心饲养，避免状态不佳而死亡。