( 四 ) 检卵及培养

1. 检卵管和表面皿的准备

在酒精灯上拉制内径为 300～400µm 的玻璃吸管,预热表面皿、PBS。每个冲卵供体猪需备2～4 个皿,写好编号,放入培养箱待用。

2. 检卵

在实体显微镜下,将胚胎吸至第一个培表面皿,吸管先吸入少许 PBS 再吸入卵,在表面皿的不同位置冲洗卵 3～5 次。依次在第二个表面皿内重复冲洗,然后把全部卵集中到一个表面皿,一只供体的卵放在一个皿内。操作室温为 20～25℃。在 2 体视显微镜下观察受精卵的形态、色调、分裂球的大小、均匀度、细胞的密度、与透明带的问隙以及变性情况等。淘汰未受精卵及发育异常的胚胎。

3. 培养

在37 ℃、5%C02 培养箱中,把胚胎作成悬滴进行培养,培养液应添加 10% 的小牛血清。

1. 输卵管移植

受体猪移植的手术法与供体猪冲卵的手术操作程序相同。而胚胎移入时是将移卵套制输卵管伞部插入输卵管,再将吸有胚胎的移卵管沿套管内导人输卵管里,退出套管3～5cm,轻 轻吹胚胎入输卵管内,再边吹边退出套管和移卵管。

2. 子宫角移植

在子宫角插入16# 针头,确保进入子宫腔内(套管),沿针头导人移卵管于子宫腔内,退出针头3～5cm,轻轻吹入胚胎,再边吹边退出针头和移卵管。随即子宫、卵巢、器官、腹膜、肌肉复位,其后与供体操作程序相同。