欢迎您推荐或发布相关实验技术、实验攻略、实验经验分享等。
细胞转染方法
2016年03月16日
来源：生物帮
作者：生物帮
责任编辑：wlladmin
摘要：细胞转染方法
2.37.1 细胞传代
(1) 试验准备：200ul/1mlTip头各一盒(以上物品均需高压灭菌)，酒精棉球，废液缸，试管架，微量移液器，记号笔，培养皿，离心管。
(2) 弃掉培养皿中的培养基，用1ml的PBS溶液洗涤两次。
(3) 用Tip头加入1mlTrypsin液，消化1分钟(37度，5%CO2)。用手轻拍培养瓶壁，观察到细胞完全从壁上脱落下来为止。
(4) 加入1ml的含血清培养基终止反应。
(5) 用Tip头多次吹吸，使细胞完全分散开。
143
(6) 将培养液装入离心管中，1000rpm离心5min。
(7) 用培养液重悬细胞，细胞计数后选择0.8X106个细胞加入一个35mm培养皿。
(8) 将合适体积完全培养液加入离心管中，混匀细胞后轻轻加入培养皿中，使其均匀分布。
(9) 将培养皿转入CO2培养箱中培养，第二天转染。
2.37.2 细胞转染
(1) 转染试剂的准备
a.将400ul去核酸酶水加入管中，震荡10秒钟，溶解脂状物。
b.震荡后将试剂放在-20摄氏度保存，使用前还需震荡。
(2) 选择合适的混合比例(1：1-1：2/脂质体体积：DNA质量)来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的DNA，震荡后在加入合适体积的转染试剂，再次震荡。
(3) 将混合液在室温放置10—15分钟。
(4) 吸去培养板中的培养基，用PBS或者无血清培养基清洗一次。
(5) 加入混合液，将细胞放回培养箱中培养一个小时。
(6) 到时后，根据细胞种类决定是否移除混合液，之后加入完全培养基继续培养24-48小时。
2.37.3 第二次细胞传代
(1) 在转染后24小时，观察实验结果并记录绿色荧光蛋白表达情
144
况。
(2) 再次进行细胞传代，按照免疫染色合适的密度0.8X105个细胞/35mm培养皿将细胞重新粉入培养皿中。
(3) 在正常条件下培养24小时后按照染色要求条件固定。
上一篇：狨猴病理剖解顺序及病料采集运输[ 03-10 ]
下一篇：荧光原位杂交实验方法及步骤[ 03-16 ]
相关文章
- 没有相关内容！
