目的 本项目拟以“苗药铁筷子”为研究对象,研究其对胶原诱导型( collagen-induced arthritis,CIA) 大鼠抗炎活性及 VEGF/ VEGFR2 / P38 MAPK 通路的调控机制。

方法 将 60 只雌性 Wistar 大鼠,随机分为正常组、 模型组、阳性药物组、铁筷子低、中、高剂量组,每组 10 只。 将牛Ⅱ型胶原蛋白溶液注入大鼠尾部,复制大鼠模型, 阳性药物组灌胃给予甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)2. 0 mg / (kg·d),每隔 1 d 1 次;铁筷子低、中、高 3 个剂量组以铁 筷子醇提取物灌胃 0. 25、0. 5 和 1 g / (kg·d),每天 1 次;正常组、模型组均采用等量 NaCl 溶液灌胃;连续灌胃 28 d。 治疗过程中,观察各组大鼠一般状况,记录体重变化,测定大鼠足底厚度;治疗结束后取大鼠后肢,经 Micro-CT 检测 骨质破坏程度、苏木素-伊红(HE)染色法进行关节滑膜的病理学研究,免疫组织化学染色观察滑膜新生血管数量, 反转录聚合酶链反应法( qRT-PCR) 在大鼠滑膜组织中检测血管内皮生长因子( vascular endothelial growth factor, VEGF)-A、血管内皮细胞生长因子受体 2( vascular endothelial growth factor receptor 2, VEGFR2)、肿瘤坏死因子 (tumer necrosis factor, TNF)-α 的 mRNA 水平,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测 VEGF、VEGFR2、p-P38、p-AKT 的表达,以探索苗药铁筷子治疗类风湿性关节炎的潜在作用机制。

结果 与正常组比较,模型组大鼠体重降低显 著(P < 0. 01),足肿胀度明显增加(P < 0. 01),病理切片可见踝关节及后肢其他小关节滑膜组织明显增生、大量炎 性细胞浸润,骨组织表面可见啃噬样病变,滑膜新生血管数量明显增多,Micro-CT 显示明显骨质破坏、骨量百分比、 骨小梁厚度、骨密度均显著下降,关节滑膜组织中 VEGF-A、VEGFR2、TNF-α mRNA 水平显著升高( P < 0. 01), VEGF-A、VEGFR2、p-P38、p-AKT 蛋白表达量均显著升高(P < 0. 01)。 与模型组比较,铁筷子醇提物呈剂量依赖性 改善上述情况,以铁筷子高剂量组效果最优,大鼠的体重显著升高(P < 0. 05),足肿胀度明显下降(P < 0. 05),滑 膜组织病理学损伤及骨组织啃噬样病变情况明显好转,滑膜组织新生血管明显减少,VEGF-A、VEGFR2、TNF-α mRNA 水平明显降低(P < 0. 01),VEGF-A、VEGFR2、p-P38、p-AKT 蛋白表达量显著降低(P < 0. 01)。

结论 苗药 铁筷子可能通过调节 VEGF/ VEGFR2 信号通路减轻 CIA 大鼠关节炎性损伤,进而发挥治疗类风湿关节炎的作用。

阅读原文：基于VEGF╱VEGFR2信号通路探究苗药铁筷子醇提物抗类风湿关节炎大鼠滑膜血管新生作用.pdf