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模型制备

环磷酰胺+氯霉素+乙酰苯肼再生障碍性贫血小鼠造模方法

2025年02月05日 浏览量: 评论(0) 来源:《常用医药研究动物模型》 作者:主编 苗明三 朱飞鹏 责任编辑:yjcadmin

1.造模材料  动物:BALB/c小鼠,6~8周龄,体重18~22g,雌雄兼用,清洁级;药物:环磷酰胺(CY);氯霉素注射液(CH);乙酰苯肼(APH)。

2.造模方法  将60只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、CY-Co组、CY-CH组、Co-CY APH组4组。

第1天Co-CY APH组皮下注射APH 80mg/kg,其余组注射等量生理盐水。第2天CY-Co组、Co-CY APH均予2cGy剂量的60Coγ射线照射处理,正常对照组及CY-CH组小鼠假照射(以铅砖屏蔽)。照射后第3对照CY-Co组连续给予CY 50mg/kg共3天,CY-CH组给予CY 50mg/k+CH 60mg/kg共3天,Co-CY APH组一次性腹腔注射CY 50mg/kg,正常组注射等量生理盐水3天。各组小鼠在造模后7天、11天、15天眼内眦静脉采血,自动血球计数仪测定外周血象,断颈处死小鼠,无菌状态下取小鼠股骨,2ml IMDM培养基冲出骨髓细胞,制备单细胞悬液,吸取100μl做骨髓有核细胞(BMC)计数。以第7天骨髓细胞按本室常规做细胞培养,制备培养体系,接种细胞,置CO2培养箱培养,7天后计数粒细胞巨噬细胞集落生成单位(colony-forming unit-granulocyte macrophage, CFU-GM)、红系爆式集落形成单位(burst-forming unit erythroid, BFU-E)、巨核细胞集落形成单位(colony-forming unit-megakaryocytes, CFU-Meg)集落数。

3.造模后生化变化

(1)造模后第7天各组外周血像的比较:空白对照组WBC为(5.12±2.33)×10的9次方个/L,RBC为(7.73±0.36)×10的12次方个/L,Hb为(141.37±13.5)g/L,PLT为(591.35±98.48)×10的9次方个/L;CY-Co组WBC为(0.74±0.41)×10的9次方个/L,RBC为(6.21±0.89)×10的12次方个/L,Hb为(116.26±13.6)g/L,PLT为(209.25±62.32)×10的9次方个/L; CY-CH组WBC为(1.95±0.75)×10的9次方个/L,RBC为(6.88±0.76)×10的12次方个/L,Hb为(119.58±15.8)g/L,PLT为(353.45±76.37)×10的9次方个/L;Co-CY APH组WBC为(0.82±0.48)×10的9次方个/L,RBC为(4.65±0.52)×10的12次方个/L,Hb为(89.47±10.3)g/L,PLT为(223.54±61.78)×10的9次方个/L。

(2)造模第15天各组外周血象的比较:空白对照组WBC为(5.72±2.73)×10的9次方个/ L,RBC为(7.48±0.36)×10的12次方个/L,Hb为(142.42±14.5)g/L,PLT为(580.62±108.25)×10的9次方个/L;CY-Co组WBC为(2.65±0.52)×10的9次方个/L,RBC为(6.35±0.92)×10的12次方个/L,Hb为(120.26±14.7)g/L,PLT为(352.75±74.24)×10的9次方个/L;CY-CH组WBC为(4.10±1.98)×10的9次方个/L,RBC为(7.05±0.85)×10的12次方个/L,Hb为(133.58±19.7)g/L,PLT为(389.55±96.72)×10的9次方个/L;Co-CY APH组WBC为(2.77±0.54)×10的9次方个/L,RBC为(5.74±0.63)×10的12次方个/L,Hb为(108.58±12.3)g/L,PLT为(360.18±81.49)×10的9次方个/L。

(3)造模第15天各组骨髓有核细胞计数比较:空白对照组骨髓有核细胞计数7天为(10.51±2.52)×10的9次方个/L,11天为(11.22±2.73)×10的9次方个/L,15天为(10.84±2.45)×10的9次方个/L;CY-Co组骨髓有核细胞计数7天为(2.07±1.83)×10的9次方个/L,11天为(3.42±1.95)×10的9次方个/L,15天为(5.24±2.01)×10的9次方个/L;CY-CH组骨髓有核细胞计数7天为(4.10±2.14)×10的9次方个/L,11天为(5.05±2.37)×10的9次方个/L,15天为(7.56±2.85)×10的9次方个/L;Co-CY APH组骨髓有核细胞计数7天为(2.11±0.74)×10的9次方个/L,11天为(3.64±0.89)×10的9次方个/L,15天为(5.81±2.13)×10的9次方个/L。

(4)造模第15天各组CFU-GM、BFU-E、CFU-Meg计算比较:空白组照组CFU-GM为(67.33±3.56)1×100000个,BFU-E为(69.00±3.63)2×100000个,CFU-Meg为(42.67±2.75)2×100000个;CY-Co组CFU-GM为(25.16±2.26)1×100000个,BFU-E为(23.67±2.74)2×100000个,CFU-Meg为(17.60±2.01)2×100000个;CY-CH组CFU-GM为(31.00±3.01)1×100000个,BFU-E为(28.00±1.91)2×100000个,CFU-Meg为(24.67±2.28)2×100000个;Co-CY APH组CFU-GM为(26.67±3.72)1×100000个,BFU-E为(24.16±1.06)2×100000个,CFU-Meg为(15.16±2.77)2×100000个。


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