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利用辅助生殖技术挽救基因修饰小鼠的实例分析
目的 利用辅助生殖技术挽救生殖障碍的基因修饰小鼠品系,为完善珍贵实验小鼠品系的拯救技术更新提供参考。
方法 对28种不同品系的9~18月龄不育雄性小鼠实施体外受精-胚胎移植 (in vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET) 技术,即通过观察不育雄性小鼠的精子密度、精子活动等指标,选择活力较强的精子用于IVFET实验,在仔鼠出生后统计受精率、异形卵率和仔鼠出生率。对12种不同品系的8~18月龄不孕雌性小鼠实施优化 的卵巢移植技术,即选取相同背景的6周龄雌性小鼠作为受体小鼠,摘除受体小鼠一侧完整的卵巢并结扎其另一侧 输卵管,然后分离出供体小鼠一侧卵巢,将其原位植入受体小鼠摘除卵巢的一侧。术后21 d将受体小鼠与相同背景 的8周龄野生型雄性小鼠合笼繁育,待仔鼠出生后,统计卵巢移植受体妊娠率、受体活产率等数据。
结果 利用 IVF-ET技术成功挽救28种小鼠品系,雄性小鼠最大年龄为18月龄。首轮IVF-ET实验成功率为89.29% (25/28)。生 殖障碍雄性小鼠IVF的平均受精率为 (51.01±14.97) %,异形卵率为 (9.03±5.28) %,仔鼠出生率 (18.60±7.03) %。 40只卵巢移植受体小鼠中39只存活,卵巢移植受体妊娠率为33.33% (13/39),卵巢移植后受体活产率为17.95% (7/39)。采用卵巢移植技术成功挽救4种小鼠品系,其中雌性小鼠最大年龄为 18 月龄;另外,8 种品系因最终未 获得存活至性成熟的子代小鼠而未被挽救。
结论 针对不同原因引起的生殖障碍雄性小鼠,特别是对于错过最佳 繁育年龄的小鼠,IVF-ET技术可有效进行品系挽救,获得子代小鼠。针对老龄雌性小鼠的品系挽救,卵巢移植技术 可作为重要备选方案,但成功率相对IVF-ET技术较低,存在一定实验风险。
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