目的 通过 ＣＲＩＳＰＲ／ Ｃａｓ９ 技术构建 Ｕｏｘ 基因敲除且能稳定遗传的小鼠品系，并评价其是否能 够模拟高尿酸血症患者的疾病特点。

方法 在 Ｕｏｘ 基因 Ｅｘｏｎ ２ ～ ４ 的前后两侧设计双 ｓｇＲＮＡ，将基因敲除所 需的 ｓｇＲＮＡ 与 Ｃａｓ９ ｍＲＮＡ 按照一定比例显微注射进小鼠的受精卵中，培养 ２ ～ ４ ｈ 后，将胚胎移植至代孕母 鼠体内并最终获得 Ｆ０ 代小鼠。 对 Ｆ０ 代小鼠进行 ＰＣＲ 鉴定与测序分析，筛选适合的 Ｕｏｘ 基因阳性敲除小鼠 与野生型（ｗｉｄｅ ｔｙｐｅ，ＷＴ）小鼠合笼获得 Ｆ１ 代，再挑选 Ｆ１ 代中杂合子（基因型为 Ｕｏｘ ^{＋ ／ －} ）雌鼠与雄鼠合笼得到 纯合的 Ｆ２ 代小鼠（基因型为 Ｕｏｘ ^{－ ／ －} ）。 最后检测 Ｕｏｘ ^{－ ／ －}小鼠与 ＷＴ 小鼠血清尿酸、尿液尿酸，血清中肌酐、尿 素、丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸氨基转移酶的含量并进行对比，通过苏木素⁃伊红（ＨＥ）染色结合 Ｍａｓｓｏｎ 染 色观察肾和肝组织的病理变化。

结果 与 ＷＴ 小鼠相比，Ｕｏｘ ^{－ ／ －}小鼠血清尿酸（雄鼠：（４７８. ４ ± １１４. ６） μｍｏｌ ／ Ｌ，Ｐ ＜ ０. ００１；雌鼠：（５０７. ７ ± １２９. ６） μｍｏｌ ／ Ｌ，Ｐ ＜ ０. ００１）、尿液尿酸（雄鼠：（４１１６. ８ ± １９２８. １） μｍｏｌ ／ Ｌ，Ｐ ＜ ０. ００１；雌鼠：（２９９８. ０ ± ５４７. ７） μｍｏｌ ／ Ｌ，Ｐ ＜ ０. ０１）、血清中肌酐（（９１. ８ ± ５５. ６） μｍｏｌ ／ Ｌ，Ｐ ＜ ０. ００１）、尿素 （（２８. ６ ± １３. ９） ｍｍｏｌ ／ Ｌ，Ｐ ＜ ０. ０５）、丙氨酸氨基转移酶（（５３. ３ ± ２３. ３） Ｕ／ Ｌ，Ｐ ＜ ０. ０１）及门冬氨酸氨基转移 酶（（２０３. ３ ± ７０. ３） Ｕ／ Ｌ，Ｐ ＜ ０. ００１）水平均显著升高。 组织病理学的结果显示，Ｕｏｘ ^{－ ／ －}小鼠的肝中可见中量 肝细胞变性，肾中可见中重度的肾小管囊性扩张、变性和纤维化，肾小球肥大增生，小血管扩张充血，间质单核 及淋巴细胞浸润。

结论 通过 ＣＲＩＳＰＲ／ Ｃａｓ９ 技术成功构建了 Ｕｏｘ 基因 Ｅｘｏｎ ２ 敲除的小鼠纯合品系，可以作 为高尿酸领域相关研究的动物模型。

阅读原文：基于ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９系统构建Ｕｏｘ基因敲除的高尿酸血症小鼠模型.pdf