目的 探究加味济生肾气汤改善缺氧微环境抗肝硬化的机制。

方法 体内实验用 CCl 4 诱导 制备大鼠肝硬化模型,设置正常组、模型组、秋水仙碱组和加味济生肾气汤低、中、高剂量( JWJSSQ low/ medium/ high-dose)组。 HE 染色和 Masson 染色观察各组大鼠肝组织病理改变;试剂盒检测各组大鼠血清肝功 能变化; ELISA 检测各组大鼠透明质酸 ( hyaluronic acid, HA)、 层粘连蛋白 ( laminin, LN)、 Ⅲ 型 前 胶 原 (procollagen Ⅲ,PCⅢ)、Ⅳ型胶原( collagen type Ⅳ,COL4) 水平;Western blot 检测大鼠缺氧诱导因子- 1α (hypoxia inducible factor-1α, HIF-1α)、Notch1、Jagged1、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)蛋 白表达。 体外实验以 HSC-T6 细胞为研究对象, CCK-8 法筛选出 CoCl 2 培养细胞最适宜 ( 100 μmol / L、 200 μmol / L、400 μmol / L、600 μmol / L 和 800 μmol / L)浓度及含药血清(5%、10%、15%和 20%)最佳干预浓度; 划痕试验检测各组细胞迁移能力;流式细胞术检测各组细胞凋亡率变化;Western blot 检测各组细胞内 HIF- 1α、Notch1、Jagged1、α-SMA、基质金属蛋白酶 9(MMP9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)蛋白表达情况。

结果 体内实验:与正常组比较,模型组大鼠肝肿胀、炎性细胞浸润和胶原沉积明显增多,假小叶出现,血清 ALT、AST、HA、LN、PCⅢ、COL4 水平明显增高,ALB 显著降低,肝组织 HIF-1α、Notch1、Jagged1、α-SMA 蛋白表 达明显升高(P<0. 01),与模型组比较,各治疗组大鼠肝肿胀、炎性细胞浸润和胶原沉积明显减少,纤维化程度 减轻,血清 ALT、AST、HA、LN、PCIII、COL4 水平明显降低,ALB 显著增高,肝组织 HIF-1α、Notch1、Jagged1、α- SMA 蛋白表达均有不同程度降低(P<0. 05);体外实验:缺氧能够促进 HSC-T6 迁移,减少 HSC-T6 凋亡,并提 高 HIF-1α、Notch1、Jagged1、α-SMA、TIMP-1 蛋白表达,降低 MMP9 蛋白表达(P<0. 01),加味济生肾气汤含药 血清能够抑制 HSC-T6 迁移,促进 HSC-T6 凋亡,并降低 HIF-1α、Notch1、Jagged1、α-SMA、TIMP-1 蛋白表达,升 高 MMP9 蛋白表达(P<0. 01),但其对 HSC-T6 细胞活化抑制的作用可被 HIF-1α 激动剂 DMOG 逆转。

结论 加味济生肾气汤能够通过 HIF-1α/ Notch 通路改善缺氧微环境,进而发挥抗肝硬化的作用。

阅读原文：加味济生肾气汤调控HIF-1α╱Notch通路改善缺氧抗肝硬化的机制研究.pdf