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登革病毒对树鼩不同组织来源细胞的易感性及感染特性研究
目的 探究登革病毒 (dengue virus,DENV) 对树鼩不同组织来源细胞的易感性及感染特征,为扩充 DENV的树鼩易感细胞库提供依据。
方法 将DENV以感染复数 (multiplicity of infection,MOI) 为0.02的剂量分 别接种于树鼩皮肤成纤维细胞 (tree shrew skin fibroblasts,TSFs)、原代树鼩肾上皮细胞 (primary tree shrew renal epithelial cells,pTRECs)、树鼩主动脉内皮细胞 (tree shrew aortic endothelial cells,TAECs)、树鼩主动脉 平滑肌细胞 (tree shrew aortic smooth muscle cells,TASMCs)、树鼩肝细胞 (tree shrew hepatocytes,THs)、 树 鼩 角 膜 基 质 细 胞 (tree shrew corneal stromal cells,TCSCs)、树 鼩 脑 微 血 管 内 皮 细 胞 (tree shrew brain microvascular endothelial cells,TBMECs) 及 树 鼩 视 网 膜 微 血 管 内 皮 细 胞 (tree shrew retinal microvascular endothelial cells,TRMECs),用常规培养DENV的C6/36、Vero、A549及BHK-21细胞系作为阳性对照。在感染病 毒后6 d内,每12 h用倒置显微镜观察各种细胞的病变效应,用实时荧光定量PCR检测细胞培养物中病毒核酸载 量,绘制病毒增殖曲线,用噬斑实验检测病毒滴度。
结果 除TRMECs外,DENV对7种树鼩细胞均易感。随着感染时间的延长,7种树鼩细胞均出现变圆、脱落、坏死及裂解等明显的病变效应。在pTRECs、TBMECs、TASMCs、TAECs和THs这5种树鼩细胞的培养裂解物中检测到的病毒核酸载量与4种阳性对照细胞接近,大于4×107拷贝/μL。以上5种树鼩细胞均能产生感染性子代病毒,其中3种树鼩细胞TAECs(3.13×105PFU/mL)、THs(2.03×105PFU/mL)、pTRECs(1.58×105 PFU/mL)中的DENV滴度较接近阳性对照细胞C6/36(3.85×105 PFU/mL),且能更早收获病毒。
结论 DENV对树鼩多种组织来源的细胞易感,且病毒增殖速度快于常见其他物种来源 的传代细胞系,其中TAECs、THs和pTRECs尤其适于DENV增殖培养。同时,这些细胞可能参与DENV在树鼩体 内的感染。
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