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6种复合固定液对金黄仓鼠视网膜组织固定效果的比较
目的 比较6种复合固定液对金黄仓鼠视网膜组织石蜡切片的影响,优化金黄仓鼠视网膜组织石蜡切片的 固定方法。
方法 取18只雄性SPF级金黄仓鼠,随机分为6组,每组3只。每只动物经腹腔注射戊巴比妥钠麻醉 后,分别使用4%多聚甲醛、Bouin's、Carnoy、Davidson's、Zenker和Helly固定液进行心脏灌注固定。将每只动 物的眼球组织取出后制作眼杯,并投入对应的复合固定液中固定,48 h后取出进行石蜡包埋,并将包埋块在切片机 下切片,然后进行苏木精-伊红 (hematoxylin and eosin,HE) 染色。在光学显微镜下观察视网膜组织细胞的形态 学特征并进行双盲法评分,统计分析各种复合固定液的固定效果和染色质量。
结果 Davidson's固定液固定后的切 片中,视网膜完整无断裂,各层结构清晰,细胞核形态良好,视网膜与巩膜、葡萄膜连接紧密;4% 多聚甲醛、 Bouin's和Carnoy固定液固定的切片中均有不同程度的视网膜断裂以及视网膜与巩膜脱离现象;Zenker和Helly固 定液固定后的切片质量最差,视网膜组织脱落明显,裂隙大,各层细胞不清晰,染色淡。对视网膜细胞形态特征进 行双盲法评分后,SPSS 27.0 软件分析结果显示:6 种固定液的平均得分差异有统计学意义 (P<0.001),其中 Davidson's固定液>4%多聚甲醛>Bouin's固定液>Carnoy固定液>Helly固定液>Zenker固定液;Zenker固定液 和Helly固定液与其他 4 种试剂的平均得分相比均有显著差异 (P<0.001),其他试剂之间两两相比无明显差异 (P>0.05)。
结论 Davidson's固定液染色效果最佳,4%多聚甲醛和Bouin's固定液染色效果次之,Carnoy固定液 染色效果较差,Zenker 固定液和 Helly 固定液染色效果最差。据此提示,金黄仓鼠视网膜组织的固定首选 Davidson's固定液,其次为4%多聚甲醛、Bouin's和Carnoy固定液。
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