目的 基于核转录因子 2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2) / 溶质载体家族 7 成员 11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11) / 谷胱甘肽过氧化物酶 4(glutathione peroxidase 4,GPX4)信号通 路,通过体内外实验研究葛根芩连汤治疗非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的作用机制。

方法 以高脂饲料长 期喂养大鼠 24 周完成 NAFLD 的诱导建模,成模大鼠随机分为正常组、模型组、葛根芩连汤高、中、低剂量组和 二甲双胍组。 自第 25 周起,按照分组情况灌胃相应药物两周直至取材。 生化试剂盒检测各组大鼠肝组织氧 化应激水平:丙二醛(malondialdehyde,MDA)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)。 Fe ²⁺试剂盒检测各组大鼠肝组织 Fe ²⁺含量。 实时荧光定量逆转录 PCR ( qRT-PCR) 法检测各组大鼠肝组织 Nrf2、血红素加氧酶 1 ( heme oxygenase-1,HO-1)、SLC7A11、谷胱甘肽合成酶(glutathione synthetase,GSS)、GPX4 和酰基辅酶 A 合成化酶 4 (acyl coenzyme A synthase,ACSL4)mRNA 的表达水平。 采用 1 mmol / L 游离脂肪酸(FFA)诱导肝癌 HepG2 细 胞产生脂质堆积模拟 NAFLD 构建体外模型,加入不同浓度葛根芩连汤和二甲双胍含药血清进行治疗。 油红 O 染色检测各组细胞脂质堆积情况。 试剂盒测定不同组 HepG2 细胞 MDA 和 GSH 含量。 细胞专用 Fe ²⁺试剂 盒检测各组细胞 Fe ²⁺含量。 qRT-PCR 法检测各组细胞中 Nrf2、HO-1、SLC7A11、GSS、GPX4 和 ACSL4 mRNA 的 表现水平。

结果 动物实验中,模型组大鼠肝组织 MDA 和 Fe ²⁺含量较正常组显著升高,GSH 含量显著降低 (P<0. 01);葛根芩连汤高、中剂量组和二甲双胍组可大幅度降低 MDA 和 Fe ²⁺含量,升高 GSH 含量,与模型组 比较(P<0. 01,P<0. 05)。 与模型组相比,葛根芩连汤高、中剂量组和二甲双胍组均能增加 Nrf2、HO-1、GSS、 GPX4 mRNA 的表达水平,降低 ACSL4 mRNA 的水平(P<0. 01,P<0. 05)。 在细胞实验中,HepG2 细胞模型组 红色脂滴较正常组明显增多,葛根芩连汤和二甲双胍的使用导致脂滴明显减少。 试剂盒检测发现,较正常组 而言,HepG2 细胞模型组 MDA 和 Fe ²⁺含量明显上升,GSH 含量显著降低(P<0. 01),而与模型组相比,葛根芩 连汤各剂量组和二甲双胍组均可显著降低 MDA 和 Fe ²⁺含量(P<0. 01),葛根芩连汤高、中、低剂量组和二甲双胍组增加 GSH 含量(P<0. 01,P<0. 05)。 qRT-PCR 实验表明,葛根芩连汤高剂量组中的 Nrf2、GSS、GPX4 和 SLC7A11,中剂量组中的 Nrf2、HO-1 和 SLC7A11,低剂量组中的 HO-1、SLC7A11 和 GSS 以及二甲双胍组中的 GSS、Nrf2、HO-1、GPX4 和 SLC7A11 mRNA 表达水平较模型组均显著增加(P<0. 01,P<0. 05)。 葛根芩连汤中、 低剂量组和二甲双胍组 ACSL4 mRNA 表达量均显著降低(P<0. 01,P<0. 05)。

结论 葛根芩连汤可通过抑制 铁死亡来改善非酒精性脂肪肝病,其作用机制可能与调节 Nrf2 / SLC7A11 / GPX4 信号通路有关。

阅读原文：基于Nrf2╱SLC7A11╱GPX4通路探讨葛根芩连汤通过抑制铁死亡改善非酒精性脂肪性肝病作用机制.pdf