目的 急性高原低氧通过调控蛋白表达诱导心肌细胞损伤,常用 Western Blot 检测蛋白变化, 但内参蛋白的选择及其变化尚无系统研究。

方法 本文主要应用低压低氧大舱模拟 6000 m 海拔低氧 24 和 72 h,苏木素-伊红( HE) 染色确定心肌损伤模型的成功建立;Western Blot 检测不同内参蛋白 vinculin、α- tubulin、EIF5、β-actin、GAPDH、cyclophilin B 和 cofilin 表达,同时应用丽春红 S 染色和考马斯亮蓝染色检测总蛋 白的表达;进一步体外应用成年小鼠心肌细胞(AMCMs)建立低氧 12 和 24 h 损伤模型,TUNEL 染色确定细胞 损伤模型的建立,Western Blot 检测上述不同内参蛋白表达,同时应用丽春红 S 染色和考马斯亮蓝染色检测总 蛋白的表达。

结果 在成功建立急性高原低压低氧 24 和 72 h 模型的基础上,总蛋白表达量一致;内参蛋白 vinculin、EIF5、β-actin、cyclophilin B 和 cofilin 表达量一致;α-tubulin 在低压低氧 24 h 组和平原对照组表达一 致,低压低氧 72 h 组较平原对照组明显下降;而 GAPDH 在低压低氧 24 h 组和低压低氧 72 h 组表达较平原对 照组明显上升。 在成功建立低氧 12 和 24 h 诱导 AMCMs 损伤的基础上,总蛋白表达量一致,内参蛋白 EIF5 和 β-actin 表达量一致,vinculin、α-tubulin、GAPDH、cyclophilin B 和 cofilin 在低氧 12 h 组和低氧 24 h 组较常氧 对照组表达升高。

结论 急性高原低压低氧和体外低氧诱导心肌细胞损伤模型进行 Western Blot 时,EIF5 和 β-actin 可作为合适的内参蛋白选择,选择总蛋白作为内参更客观。

阅读原文：急性高原低氧诱导心肌损伤小鼠模型免疫印迹实验内参蛋白的选择.pdf