基于NF-κB信号通路探索臭氧水关节腔注射调控miR-214-3p对KOA大鼠软骨损伤的作用机制
目的 基于 miR-214-3p / NF-κB 信号通路探索臭氧水关节腔注射对 KOA 大鼠软骨修复的作用 机制,为臭氧水临床运用提供理论依据。
方法 60 只雄性 SD 大鼠,随机分为空白组和实验组。 实验组采用 碘乙酸钠关节腔注射建立 KOA 大鼠模型后,随机分为模型组、臭氧水组、臭氧水+AAV-NC 组和臭氧水+AAVmiR-214-3p inhibitor 组。 治疗后,通过关节软骨表面大体评分、HE 染色、改良的 Mankin’ s 评分评价关节软骨 修复状态;ELISA 法检测血清 IL-1β、TNF-α 和 MMP-13 的表达水平;RT-PCR 检测 IKKβ、p65、IκBα 及 miR-214- 3p 的 mRNA 表达;Western blot 检测各组软骨组织中 IKKβ、p65 及 p-IκBα 蛋白表达水平。
结果 与空白组相 比,其余各组大鼠均出现不同程度软骨损伤,臭氧水组和臭氧水+AAV-NC 组评分较臭氧水+AAV-miR-214-3p inhibitor 组显著降低(P<0. 05);ELISA 结果显示,臭氧水组和臭氧水+AAV-NC 组在 IL-1β、TNF-α 和 MMP-13 含量上,相比于模型组及臭氧水+AAV-miR-214-3p inhibitor 组显著降低(P<0. 05)。 RT-PCR 结果显示,与模型 组和臭氧水+AAV-miR-214-3p inhibitor 组相比,臭氧水组和臭氧水+AAV-NC 组的大鼠软骨组织中 IKKβ 和 p65 的 mRNA 表达水平明显下调,同时 IκBα 的 mRNA 明显上调(P<0. 05)。 Western blot 结果显示,与模型组 和臭氧水+AAV-miR-214-3p inhibitor 组相比较,臭氧水组和臭氧水+AAV-NC 组的大鼠软骨组织中,IKKβ、p65 及 p-IκBα 的蛋白表达水平呈显著下调,相反,IκBα 蛋白表达水平呈上调表现(P<0. 05)。
结论 臭氧水关节 腔注射显著改善了 KOA 大鼠的软骨损伤,其作用机制可能与 miR-214-3p 介导的 NF-κB 信号通路抑制有关。
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