1.造模材料  动物：老年小鼠，昆明种，雄性，12月龄，体重均为49～51g；青年小鼠，昆明种，2月龄，雄性；Wistar种大鼠72只，3～4周龄，200～220g。药物：D-半乳糖。

2.造模方法

(1)将2月龄昆明种雄性小鼠造模，造模组于颈背部皮下按120mg/(kg·天)的剂

量注射D-半乳糖，连续30天，正常对照组注射等体积灭菌生理盐水。

(2)给小鼠颈背部皮下注射5％D-半乳糖，0.5ml/只，每天1次，连续注射6周。

3.造模原理  中医认为“肾生骨髓”。肾生髓是肾生理功能的重要组成部分。D-半乳糖在半乳糖氧化酶作用下，氧参与反应，生成醛糖和过氧化氢。反应过程中产生超氧阴离子自由基，其过量损伤可产生拟衰老效应。D-半乳糖引起衰老反应中原癌基因H-ras和C- fos的表达能力下降，神经元总蛋白和RNA含量减少。

4.造模后一般变化  实验动物体质消瘦，活动减少，衰老动物多处于肾虚状态，肾生髓功能下降，其骨髓细胞GM-CSF基因表达水平也下降。动物出现毛发枯黄无光，行动迟缓，自主活动明显减少，学习记忆下降，脑组织过氧化脂质(LPO)、脂褐质(LF)增高，B型单胺氧化酶(MAO)活性增高，胸腺、脾脏萎缩。

5.造模后生化变化

(1)小鼠脾淋巴细胞产生白介素(IL-2)的影响：青年小鼠的脾淋巴细胞产生的IL-2[pg/(ml·L)]为3.144±0.314；老年对照组为0.865±0.106。与青年对照组比较，老年小鼠的脾淋巴细胞产生IL-2呈显著性变化；D-半乳糖致衰老小鼠脾淋巴细胞产生的IL-2[pg/(ml·L)]正常对照组为3.014±0.083，模型对照组为1.026±0.133，模型组与正常对照组比较呈显著性变化。

(2)应用半定量逆转录聚合酶链式反应技术(RT-PCR)检测小鼠骨髓有核细胞GM- CSF基因转录水平的变化：对照组巨噬小鼠骨髓细胞GM-CSF mRNA表达量与内参照基因β-action mRNA表达量百分比值为20.06±3.65，模型组为10.67±1.79，模型组与正常对照组比较呈显著性变化。

(3)衰老大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物(GSH-PX)活力及丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量：正常血清SOD、GSH-PX活力(U/ml)及 MDA、NO含量(nmol/ml)分别为228.59±29.94、189.20±18.80、43.97±12.14、1.92±0.64；模型组为180.13±31.65、152.31±21.49、25.75±9.59、2.96±0.8422。模型组与正常组相比较，血清SOD、GSH-PX活力及NO含量明显下降，MDA显著增高，表明该亚急性衰老模型成功、可靠。

6.造模后病理变化  对衰老模型小鼠胸腺及脾脏组织的影响：正常组胸腺、脾脏及脑均为正常。模型组胸腺萎缩，皮质变薄，淋巴细胞稀疏，髓质缩小，脾脏白髓缩小，细胞减少，红髓扩大并充血；脑组织可见部分神经细胞和部分胶质细胞有退行性改变。模型组胸腺厚度、胸腺皮质细胞数、脾小结大小及脾淋巴细胞数均明显低于空白对照组，说明衰老模型小鼠的胸腺及脾脏均萎缩。

7.注意事项  实验周期延长，宜选用雌性小鼠，因为雄性小鼠群居时，容易发生咬斗，尾部常见咬伤、感染，影响结果。小鼠宜在(22±2)℃、空气新鲜环境中饲养，皮下注射时注意无菌操作，保持清洁。