中科院神经所杜久林团队发表制作基因敲入周细胞可视化斑马鱼品系的详细实验流程
2024年12月18日
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来源：中国斑马鱼信息中心
作者：中国斑马鱼信息中心
责任编辑：lascn
摘要：近日，Cell出版社旗下的STAR Protocols杂志在线发表了中国科学院脑科学与智能技术卓越创新中心杜久林研究员团队题为“Protocol for generating a pericyte reporter zebrafish line Ki(pdgfrb-P2A-GAL4-VP16) using a CRISPR-Cas9-mediated knockin technique”的实验流程论文。该文详细阐述了用于标记周细胞的斑马鱼品系制作过程。
近日，Cell出版社旗下的STAR Protocols杂志在线发表了中国科学院脑科学与智能技术卓越创新中心杜久林研究员团队题为“Protocol for generating a pericyte reporter zebrafish line Ki(pdgfrb-P2A-GAL4-VP16) using a CRISPR-Cas9-mediated knockin technique”的实验流程论文。该文详细阐述了用于标记周细胞的斑马鱼品系制作过程。
周细胞是脑血管的重要组成部分，参与血脑屏障的形成和神经-血管耦合，其异常状态与多种神经系统疾病密切相关。然而，在体研究的工具的缺乏限制了周细胞发育和功能的深入研究。为此，研究团队靶向周细胞标志基因pdgfrb，利用CRISPR/Cas9技术制作了标记周细胞的基因敲入斑马鱼品系，并对大脑周细胞的早期发育过程进行了在体研究，发现了血流调节大脑周细胞发育的机制[1]。为进一步介绍基因敲入周细胞可视化斑马鱼品系的建立的详细过程，在该团队的靶向内含子的基因敲入技术的方法（Li et al., Cell Research 2015）的基础上，文中详尽介绍了周细胞报告斑马鱼品系Ki(pdgfrb-P2A-GAL4-VP16)的制作过程，包括sgRNA靶点的选择、sgRNA的合成、供体质粒的构建、显微注射、品系鉴定和活体成像等，提供了利用基因敲入方法制作标记特定细胞类型斑马鱼品系的一套标准的实验流程。
图2 A. 利用CRISPR/Cas9技术制作Ki(pdgfrb-P2A-GAL4-VP16)斑马鱼品系的原理示意图；B. 靶向pdgfrb基因敲入Gal4可以在F0代Tg(UAS:EGFP)斑马鱼胚胎中实现大脑周细胞的高效高效标记。绿色为周细胞，比例尺为50 µm。
中科院神经所李佳副研究员和杜久林研究员为该论文的通讯作者，博士后訾化星和助理研究员彭小兰为共同第一作者。该研究获得了科技部国家重点研发计划、国家自然科学基金、上海市自然科学基金、SA-SIBS优秀人才奖励基金和中国科学院青促会的资助。
参考文献：
1. Zi H, Peng X, Cao J, Xie T, Liu T, Li H, Bu J, Du J, Li J. Piezo1-dependent regulation of pericyte proliferation by blood flow during brain vascular development. Cell Rep. 2024 Jan 23;43(1):113652.
