目的 本研究通过 ＣＲＩＳＰＲ／ Ｃａｓ９ 技术构建 Ａｐｏｅ 基因敲除小鼠模型，以进一步探讨 Ａｐｏｅ 在血脂代 谢和形成动脉粥样硬化病症中的功能。

方法 针对 Ｃ５７ＢＬ／ ６Ｊ 小鼠 Ａｐｏｅ 基因设计 ２ 个 ｓｇＲＮＡ 靶位点，并将 ｓｇＲＮＡ 和 Ｃａｓ９ ｍＲＮＡ 共同注入受精卵，移植至 ＩＣＲ 受体鼠，获得 Ｆ_０ 代小鼠，通过提取鼠尾 ＤＮＡ 以及 ＰＣＲ 筛选，获得阳性 小鼠。 通过荧光定量逆转录 ＰＣＲ 法检测小鼠各组织中 Ａｐｏｅ ｍＲＮＡ 表达水平。 检测小鼠血清中的血脂指标，并通 过油红 Ｏ 染色主动脉血管，以检测动脉内膜脂质的积聚。

结果 ＰＣＲ 及测序结果确认成功构建了 Ａｐｏｅ 基因敲除 小鼠（Ｃ５７ＢＬ／ ６⁃Ａｐｏｅ ^ｅｍ１ ／ Ｎｉｆｄｃ，简称 Ａｐｏｅ ＫＯ 小鼠）；实时荧光定量逆转录 ＰＣＲ 实验结果显示，Ａｐｏｅ ＫＯ 纯合小鼠 （Ａｐｏｅ ^{－ ／ －} ）的肝、大脑、脾、肾和肺组织中的 Ａｐｏｅ ｍＲＮＡ 显著降低；血清总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平显著升 高，且雄性小鼠的血清高密度脂蛋白胆固醇水平显著降低；主动脉血管油红 Ｏ 染色显示，在相同且食用正常饲料条 件下，野生型（ｗｉｌｄ⁃ｔｐｙｅ，ＷＴ）小鼠无脂质堆积，Ａｐｏｅ ^{－ ／ －}小鼠则呈现大量红色脂质斑块。

结论 本研究成功构建 Ａｐｏｅ 基因敲除小鼠，该纯合子小鼠在非高脂饲料下呈典型的异常血脂代谢及主动脉内膜脂质积聚特征，为 Ａｐｏｅ ＫＯ 小 鼠资源提供了背景数据，为血脂代谢异常表型研究提供新模型。

阅读原文：通过ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９技术构建Ａｐｏｅ基因敲除小鼠模型及其表型研究.pdf