目的 探讨 DNA 甲基转移酶 1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)调控 LSM4 蛋白(Sm-like protein-4, LSM4)在同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)诱导小鼠肝细胞凋亡中的作用及机制研究。

方法 将 ApoE ^{- / -}小鼠(12 只)均分为 2 组,给予普通饲料喂养设为饮食对照组(ND 组,n = 6),给予高蛋氨酸饲料喂养设为高蛋氨酸组(HMD 组,n = 6);NCTC1469 小鼠正常肝细胞分为正常对照组(Control 组,0 μmol / L Hcy)、Hcy 干预组(Hcy 组,100 μmol / L Hcy)、转染干扰片段对照组( si-NC 组,0 μmol / L Hcy)、转染 LSM4 干扰片段组( si-LSM4 组,0 μmol / L Hcy)、转染 DNMT1 干扰片段组(si-DNMT1 组,0 μmol / L Hcy)、Hcy 干预下对照干扰组(Hcy+si-NC 组,100 μmol / L Hcy)、Hcy 干预下 LSM4 干扰组( Hcy+si-LSM4 组,100 μmol / L Hcy) 和 Hcy 干预下 DNMT1 干扰组( Hcy +si-DNMT1 组,100 μmol / L Hcy);NCBI 数据库分析 LSM4 在多种组织中表达;实时荧光定量 PCR( quantitative real-time PCR, qRTPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测小鼠组织(HMD 组和 ND 组)和肝细胞(Control 组和 Hcy 组)LSM4 蛋白表 达差异;Western blot 检测凋亡指标 Bcl-2 相关 X 蛋白(Bcl-2-associated X,Bax) 和 B 淋巴细胞瘤- 2 蛋白( B-cell lymphoma-2,Bcl-2)表达变化;流式细胞术检测 Control 组、Hcy 组、Hcy+si-NC 组和 Hcy+si-LSM4 组细胞凋亡率变化; MethPrimer 在线软件分析 LSM4 启动子区 CpG 岛;qRT-PCR 和 Western blot 检测 Hcy+si-DNMT1 组中 LSM4 蛋白表 达。

结果 与 ND 组、Control 组相比,HMD 组、Hcy 组 LSM4 蛋白表达显著增高(P<0. 05);与 Control 组比较,Hcy 组 中 Bax 蛋白表达显著上调(P<0. 05),而 Bcl-2 表达明显降低(P<0. 05);与 Hcy+si-NC 组比较,Hcy+si-LSM4 组中 Bax 蛋白表达量显著减少(P<0. 05),Bcl-2 蛋白表达量明显增多(P<0. 05);与 Control 组相比,Hcy 组细胞凋亡率显 著升高(P<0. 05);相较 Hcy+si-NC 组,Hcy+si-LSM4 组细胞凋亡率下降(P<0. 05);MethPrimer 在线软件分析显示 LSM4 启动子区 GC 含量丰富且存在 1 个 CpG 岛;与 Hcy+si-NC 组相比,Hcy+si-DNMT1 组 LSM4 蛋白表达增高(P< 0. 05)。

结论 DNMT1 通过调控 LSM4 低甲基化使其表达升高,从而促进 Hcy 诱导的小鼠肝细胞凋亡。

阅读原文：DNMT1调控LSM4在Hcy诱导小鼠肝细胞凋亡中的作用及其研究.pdf