目的 通过转录组测序技术（ＲＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ，ＲＮＡ⁃ｓｅｑ）分析复方胆草颗粒干预高脂饲料复合四氯 化碳（ｃａｒｂｏｎ ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｉｄｅ，ＣＣｌ _４ ）诱导的非酒精性脂肪性肝炎的作用机制。

方法 ４５ 只雄性 Ｃ５７ＢＬ／ ６Ｊ 小鼠随机分为 正常对照组、模型对照组、奥贝胆酸组（１０ ｍｇ ／ （ｋｇ·ｄ ））、复方胆草颗粒低、高剂量组（３. ７４ ｇ ／ （ｋｇ·ｄ）、７. ４８ ｇ ／ （ｋｇ·ｄ））， 每组 ９ 只。 正常对照组喂养普通饲料，其余各组小鼠给予高脂饲料并复合 ＣＣ１_４ 皮下注射，首次注射 １００％ ＣＣ１４ 溶 液（４ ｍＬ／ ｋｇ），之后 ４０ ％ ＣＣ１_４ ⁃橄榄油溶液（２ ｍＬ／ ｋｇ），每周 ２ 次，共 ６ 周。 奥贝胆酸组、复方胆草颗粒低、高剂量组 从第 ３ 周开始给药，共给药 ４ 周。 末次给药 １２ ｈ 后，取各组小鼠血清和肝组织，生化试剂盒检测小鼠血清肝功能； 苏木素⁃伊红（ＨＥ）、天狼猩红及油红 Ｏ 染色观察小鼠肝组织病理学变化；酶联免疫吸附实验（ＥＬＩＳＡ）检测小鼠肝组 织白细胞介素⁃６ （ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ⁃６， ＩＬ⁃６）、 白细胞介素⁃１０ （ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ⁃１０， ＩＬ⁃１０）、 肿 瘤 坏 死 因 子⁃α （ ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ⁃α，ＴＮＦ⁃α）和转化生长因子⁃β（ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｂｅｔａ，ＴＧＦ⁃β）水平；免疫组化观察小鼠肝组织 α⁃平滑 肌肌动蛋白（α⁃ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ａｃｔｉｎ，α⁃ＳＭＡ）的表达；应用 ＲＮＡ⁃ｓｅｑ 分析差异基因并进行功能富集分析、采用荧光定 量逆转录 ＰＣＲ（ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ＰＣＲ，ｑＲＴ⁃ＰＣＲ）验证差异基因 ｍＲＮＡ 的表达，再以脱氧核苷酸末端 转移酶介导的 ｄＵＴＰ 缺口末端标记（ＴｄＴ⁃ｍｅｄｉａｔｅｄ ｄＵＴＰ ｎｉｃｋ⁃ｅｎｄ ｌａｂｅｌｉｎｇ，ＴＵＮＥＬ）染色检测凋亡情况。

结果 与正常 对照组比较，模型对照组小鼠血清谷丙转氨酶（ａｌａｎｉｎｅ ａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＡＬＴ）、总胆固醇（ ｔｏｔａｌ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ，ＴＣ）、谷草 转氨酶（ａｓｐａｒｔａｔｅ ｔｒａｎｓａｍｉｎａｓｅ，ＡＳＴ）、甘油三酯（ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ，ＴＧ）水平均明显升高（Ｐ ＜ ０. ０１），肝组织炎性细胞浸润 明显，汇管区及小叶间胶原沉积，油红 Ｏ 染色显示红色脂滴面积显著增加（Ｐ ＜ ０. ０１），肝组织 ＩＬ⁃６ 和 ＴＮＦ⁃α 水平明 显升高（Ｐ ＜ ０. ０１），ＩＬ⁃１０ 和 ＴＧＦ⁃β 水平下降（Ｐ ＜ ０. ０１），α⁃ＳＭＡ 的表达明显升高（Ｐ ＜ ０. ０１）；与模型对照组比较， 复方胆草颗粒低、高剂量组和奥贝胆酸组小鼠 ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＴＣ 和 ＴＧ 水平显著降低（Ｐ ＜ ０. ０１），肝组织炎性细胞浸 润，汇管区及小叶间胶原沉积和红色脂滴面积减少（Ｐ ＜ ０. ０１），肝组织 ＩＬ⁃６ 和 ＴＮＦ⁃α 水平明显降低（Ｐ ＜ ０. ０１）， ＩＬ⁃１０ 和 ＴＧＦ⁃β 水平升高（Ｐ ＜ ０. ０５，Ｐ ＜ ０. ０１），α⁃ＳＭＡ 的表达明显降低（Ｐ ＜ ０. ０１）。 ＲＮＡ⁃ｓｅｑ 测序结果显示，正常 对照组与模型对照组差异表达的基因共 ２８１９ 个，上调基因 ５４３ 个，下调基因 ２２７６ 个；模型对照组与复方胆草颗粒 组差异表达的基因共 ２４０ 个，上调基因 ２０６ 个，下调基因 ３４ 个。 两组交集基因 ２２１ 个，功能富集主要集中在细胞周 期（ Ｃｄｔ１，Ｐｌｋ１，Ｂｕｂ１ｂ，Ｔｔｋ，Ｋｎｌ１，Ｅｓｃｏ２，Ｃｄｃ６，Ｎｄｃ８０，Ｃｄｃ２５ｂ， Ｓｇｏ１，Ｃｃｎｂ２，Ｅｓｐｌ１，Ｃｃｎｅ１，Ｍｃｍ４，Ｍｃｍ５，Ｆｂｘｏ５，Ｂｕｂ１， Ｍｃｍ２），凋亡（Ｃａｓｐａｓｅ３，Ｂａｘ，Ｐ５３，Ａｐａｆ１，Ｂａｋ，Ｃａｓｐａｓｅ８），Ｐ５３ 信号通路（Ｐ５３，Ｃｃｎｂ２，Ａｐａｆ１，Ｂａｋ，Ｂａｘ，Ｇｔｓｅ１，Ｃａｓｐａｓｅ３， Ｃｃｎｅ１），花生四烯酸代谢通路（Ｈｐｇｄｓ，Ｃｙｐ２ｃ５４，Ｃｙｐ２ｂ１０，Ｔｂｘａｓ１，Ｃｙｐ２ｃ５０），半乳糖代谢（Ｈｋ３，Ｇｌａ，Ｈｋ２，Ａｋｒ１ｂ７）等信 号通路。 ＲＮＡ⁃ｓｅｑ 测序分析发现复方胆草颗粒主要调控凋亡信号通路，并以 ｑＲＴ⁃ＰＣＲ 证实：相较于正常对照组，模 型对照组肝组织 Ｃａｓｐａｓｅ３，Ｂａｘ，Ｐ５３，Ａｐａｆ１，Ｂａｋ 和 Ｃａｓｐａｓｅ８ ｍＲＮＡ 表达明显升高（Ｐ ＜ ０. ０５）；与模型对照组比较，复方胆草颗粒各组肝组织 Ｃａｓｐａｓｅ３，Ｂａｘ，Ｐ５３，Ａｐａｆ１，Ｂａｋ 和 Ｃａｓｐａｓｅ８ ｍＲＮＡ 表达明显降低（Ｐ ＜ ０. ０１）；ＴＵＮＥＬ 染色结 果表明复方胆草颗粒各组肝细胞细胞核固缩及凋亡小体数量减少（Ｐ ＜ ０. ０１）。

结论 复方胆草颗粒对高脂饲料复 合 ＣＣｌ _４ 致非酒精性脂肪性肝炎具有显著的保护作用，其作用机制可能与调节凋亡相关基因有关。

阅读原文：基于转录组学分析复方胆草颗粒对非酒精性脂肪性肝炎小鼠肝细胞凋亡的影响.pdf