1.造模材料  动物：选用体重220～250g健康成熟未育的Wistar大鼠，雌鼠24只，雄鼠；药物：亚乙基硫脲(ethylenethiourea, ETU)(纯度99％)，trizol、AMV逆转录酶(AMV RTase)、AMV优化Tag酶(AMV-optimized Taq)、脱氧核糖核苷酸(dNTP)、RNA酶(Rnase)、琼脂粉等。

2.造模方法

(1)动物配对分组：按雌雄比例2：1晚上合笼过夜，次日晨雌鼠做阴道拭子涂片。在光镜下见到精子即提示交配，当日为孕0天，并随机分为2组。大鼠妊娠期为19～20天，其中8～15天为胎鼠消化道发育时期。实验组于孕11、13天按125mg/kg的1％ETU胃管注入大鼠胃内，对照组灌入等量蒸馏水，继续保持妊娠。孕16天处死母鼠，无菌剖腹取出胎鼠，先观察有无肉眼畸形，然后移入超净工作台内(所有的手术器械经180℃干烤去除残存RNA酶)。每只雌鼠产仔8～12只，实验组每只孕鼠取体重相近的无肛畸形胎鼠，对照组每只取体重相近的正常胎鼠。分离直肠末端1cm左右肠管，分别放入经焦碳酸二乙酯(DEPC)处理过的无菌eppendorf管中，投入液氮保存。

(2)RNA提取：胎鼠肠管组织剪碎后加入1ml TRIZOL提取液，吹打成乳状。再用氯仿、异丙醇、乙醇等处理提取总RNA。紫外分光光度计测吸光度A260值和A280值，计算提取物的浓度。2％琼脂糖凝胶电泳观察RNA是否降解，总RNA经定量后用DEPC水稀释至1mg/ml的溶液。采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测Gli-2基因表达，比较两组之间Gli-2基因表达水平。

3.造模后一般变化  实验组胎鼠可见无肛畸形，其发生率为58.12％，并有吸收胎、死胎，而对照组无上述改变，产仔数量无明显差异。

4.造模后生化变化

(1)Gli-2基因mRNA的表达：总RNA纯度：经紫外分光光度计检测总RNAA260/A280介于1.6～1.9，说明提取的总RNA纯度良好。

(2)内参照：β-微管蛋白(β-tubulin)在各反应体系中扩增结果基本一致，证实 PCR反应基本上真实反映Gli-2基因的表达。

(3)RT-PCR半定量检测结果：ETU致畸胎鼠直肠末端Gli-2基因mRNA(0.78±0.02)明显低于正常胎鼠直肠末端(0.89±0.01)。