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基于16S rRNA测序的2型糖尿病db/db小鼠模型口腔菌群差异分析
目的 研究db/db小鼠口腔菌群的改变,为探寻2型糖尿病与口腔微生态的联系提供实验基础。
方法 选 取8只10周龄雄性db/db小鼠为糖尿病实验组,8只10周龄雄性db/m小鼠为正常对照组。适应性喂养5 d后,在相 同饲料饲养的第6天和第37天行尾静脉采血,测定两组小鼠的空腹血糖 (fasting blood glucose,FBG) 水平和口 服葡萄糖耐量 (oral glucose tolerance test,OGTT),以验证糖尿病模型的可靠性。在相同饲料饲养的第15天采集 两组小鼠两侧颊黏膜、舌背与舌腹、口底黏膜、上腭硬区黏膜、上下颌牙龈的龈上区域的口腔菌群样本,提取口腔 微生物的基因组DNA后,使用GeneAmp 9700热循环仪对其中16S核糖体RNA (16S ribosomal RNA,16S rRNA) 基因的V3~V4 区进行扩增,然后在Illumina MiSeq平台上通过双标引扩增和测序对口腔菌群结构进行评估,然后 应用QIIME (version 1.6.0) 软件进行生物信息学分析。
结果 实验开始后第6天和第37天的FBG水平和OGTT检 测结果均显示db/db小鼠比db/m小鼠表现出明显的2型糖尿病症状。α多样性分析显示两组小鼠的口腔菌群在多样 性上无显著差异 (P>0.05),而在丰富度上差异显著 (P<0.05)。主坐标分析显示db/db小鼠的口腔菌群结构与 db/m小鼠存在显著差异 (P<0.05),物种组成分析以及LEfSe分析显示db/db小鼠口腔菌群在门水平以变形菌门 (p_Proteobacteria) 为主的相对丰度显著上升 (P<0.05),而在属水平上变形杆菌属 (g_Proteus) 和肠球菌属 (g_Enterococcus) 的相对丰度极显著上升 (P<0.001)。
结论 2型糖尿病db/db小鼠的口腔菌群结构和丰富度均 较血糖正常的对照小鼠出现了显著变化。
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