CCl4损伤法致肾功能损害肾虚证模型
1.造模材料 动物:小鼠,昆明种NIH系,雌雄兼用,体重18~30g;大鼠,雄性,体重200~300g;兔;豚鼠。药物:CCl4。
2.造模方法
(1)给实验动物灌服CCl4花生油或菜油液,小鼠灌胃给予CCl4花生油液10mg/kg,一次性给药,4h后出现证候;或皮下注射1000mg/kg,第1天和第6天用药,2天后观察。或给大鼠皮下注射CCl4花生油5000mg/kg,第1天和第4天2次给药,2天后观察。或给兔皮下注射CCl4菜油液3000mg/kg,1次给药,21天内观察。或给豚鼠皮下注射 CCl4菜油液1200mg/kg,一次给药;或1500mg/kg,连续注射3天,给药后10天内观察。
(2)7%CCl4的配制:取CCl4用橄榄油配成7%CCl4(V/V)的溶液。采用注射 CCl4致小鼠肝损伤模型。正常对照组腹腔注射生理盐水,其余各组均注射7%CCl4,剂量均为10ml/kg,1周2次,连续7周。造模期间不限饮食量,自由饮水。
3.造模原理 CCl4反复多次给药,易造成慢性肝中毒,致使肝细胞变性,纤维增生,甚至肝硬化。由于肝小叶结构紊乱,静脉回流受阻,肝静脉与门静脉高压,促进肝内动静脉吻合支形成,致使肝细胞供血减少,血清蛋白减少,血清转氨酶升高。由于肝细胞纤维增生,可见血清总羟脯氨酸含量降低
4.造模后一般变化 造模动物出现行为迟缓,性情烦躁,易被激怒,食欲减退,体重下降等症状。死亡率增高,痛阈增高。
5.造模后生化变化 CCl4小鼠血清转氨酶(ALT,IU/L)、天冬氨酸氨基转移酶(AST,IU/L)正常对照组分别为26.11±6.31、54.00±5.15;模型组分别为421.22±90.92、510.00±92.65。与正常组比较CCl4所致的模型对照组小鼠血清ALT、AST明显升高,说明造模成功。
6.造模后病理变化
(1)肝的病理学观察:空白对照组:肝小叶结构正常,肝细胞索排列规则,以中央静脉为中心呈放射状排列,肝细胞无变性、坏死,无界面性炎及纤维化。模型组:肝小叶结构紊乱,中央静脉偏离或消失;肝细胞索排列紊乱,中央静脉区及肝小叶周边区出现明显肝细胞大泡性脂肪变性、气球样变性,少数细胞肿胀,散在不同程度的小叶内坏死、碎屑坏死、桥接坏死;有凋亡细胞;汇管区扩大,有较多炎性细胞。
(2)Masson三色胶原染色病理学观察:空白对照组:肝小叶结构完整,偶见汇管区及中央静脉区血管壁着色。模型组:肝脏正常小叶结构破坏,形成典型的假小叶结构,中央静脉偏离或消失;胶原大量沉积,汇管区着色强烈,纤维间隔增宽;肝窦周围及较多肝细胞内亦见明显着色。
7.注意事项 CCl4剂量不宜过大,否则易造成动物中毒死亡。CCl4一般需用植物油稀释成所需浓度,也可用矿物油。