目的 探讨八月札乙醇提取物（ｅｔｈａｎｏｌ ｅｘｔｒａｃｔ ｏｆ Ａｋｅｂｉａ ｔｒｉｆｏｌｉａｔｅ （Ｔｈｕｎｂ． ） Ｋｏｉｄｚ，ＥＥＡＴＫ）对人肝癌 细胞增殖、凋亡的影响及可能作用机制。

方法 体外培养人肝癌细胞（Ｈｅｐ３Ｂ 和 Ｈｕｈ⁃７），设置空白对照组、索拉菲 尼（Ｓｏｒａｆｅｎｉｂ，５ μｍｏｌ ／ Ｌ）组及 ＥＥＡＴＫ 组（０. １０、０. １５、０. ２０、０. ３ ｍｇ ／ ｍＬ），分别给予对应药物干预，采用 ＣＣＫ⁃８ 法检 测不同分组的药物干预对肝癌细胞活力的影响，筛选最佳作用浓度用于后续实验；采用 ＥｄＵ 染色法、克隆形成实 验、Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ⁃ＦＩＴＣ／ ＰＩ 双染法观察 ＥＥＡＴＫ（０. １５ ｍｇ ／ ｍＬ）对人肝癌细胞（Ｈｅｐ３Ｂ 和 Ｈｕｈ⁃７）增殖和凋亡的影响；转录 组测序分析 ＥＥＡＴＫ 调控 Ｈｅｐ３Ｂ 细胞增殖、凋亡的差异表达基因；使用基因本体论（ ｇｅｎｅ ｏｎｔｏｌｏｇｙ，ＧＯ）和京都基因 与基因组百科全书（Ｋｙｏｔｏ Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅｓ，ＫＥＧＧ）分析差异表达基因的功能及富集通路；并联合 比较毒物基因组学（Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｔｏｘｉｃｏｇｅｎｏｍｉｃｓ Ｄａｔａｂａｓｅ，ＣＴＤ）数据库分析与肝癌增殖、凋亡相关基因，应用 ｑＲＴ⁃ ＰＣＲ 验证关键基因表达情况。

结果 与空白对照组相比，随着 ＥＥＡＴＫ 浓度增加，能够显著抑制 Ｈｅｐ３Ｂ 和 Ｈｕｈ⁃７ 细 胞的活力（Ｐ＜０. ０１）；０. １５ ｍｇ ／ ｍＬ 的 ＥＥＡＴＫ 作用肝癌细胞后，ＥｄＵ 阳性细胞率、细胞克隆形成率均显著降低（均 Ｐ＜ ０. ０１），同时细胞凋亡率显著增加（Ｐ＜０. ０１）；Ｈｅｐ３Ｂ 细胞转录组测序结果分析显示，与空白对照组相比，ＥＥＡＴＫ 引 起 １５７７ 个基因表达发生显著改变（Ｐ＜０. ０１），其中表达上调差异基因 ９４２ 个，表达下调差异基因 ６３５ 个。 ＧＯ 功能 富集分析发现差异表达基因主要显著富集于胆固醇合成、炎症、细胞外基质中。 ＫＥＧＧ 通路分析提示 ＥＥＡＴＫ 可能 主要通过转化生长因子－β（ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ⁃β，ＴＧＦ⁃β）信号通路及核因子－κＢ（ ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒ ｋａｐｐａ⁃Ｂ，ＮＦ⁃ κＢ）信号通路发挥抑癌作用。 ＣＴＤ 分析及 ｑＲＴ⁃ＰＣＲ 检测显示 ＥＥＡＴＫ 可引起 ＢＩＲＣ５、细胞周期蛋白依赖性激酶 １ （ｃｙｃｌｉｎ⁃ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｋｉｎａｓｅｓ １，ＣＤＫ１）等细胞凋亡相关基因的表达显著下调（Ｐ＜０. ０１），周期蛋白抑制因子 １Ａ（ ｃｙｃｌｉｎ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｋｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ １Ａ，ＣＤＫＮ１Ａ）、脯氨酸羟化酶 ３（ｅｇｌ⁃９ ｆａｍｉｌｙ ｈｙｐｏｘｉａ ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｆａｃｔｏｒ ３，ＥＧＬＮ３）的表达显著 上调（Ｐ＜０. ０１）；同时，可引起 ＦＡＭ８３Ｄ（ｆａｍｉｌｙ ｗｉｔｈ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ８３Ｄ，ＦＡＭ８３Ｄ）、ＭＫＩ⁃６７ 等细胞增殖相关基因 显著下调（Ｐ＜０. ０１），ＭＹＣ、叉头框蛋白 １（ｆｏｒｋｈｅａｄ ｂｏｘ Ｃ１，ＦＯＸＣ１）等表达显著上调（Ｐ＜０. ０１）。

结论 ＥＥＡＴＫ 可抑 制细胞增殖并诱导凋亡，通过调节 ＴＧＦ⁃β 及 ＮＦ⁃κＢ 信号通路中相关基因的表达而发挥抗肝癌作用。

阅读原文：八月札乙醇提取物对人肝癌细胞抑制增殖、促进凋亡及转录组学分析.pdf