目的 探究益肾逐瘀通络汤对膝骨关节炎（ｋｎｅｅ ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ， ＫＯＡ）大鼠软骨细胞焦亡和铁死 亡的影响。

方法 ４０ 只 ＳＤ 大鼠随机分为假手术组（１０ 只）和造模组（３０ 只）；造模组大鼠右后肢膝关节均采 用前交叉韧带离断术（ａｎｔｅｒｉｏｒ ｃｒｕｃｉａｔｅ ｌｉｇａｍｅｎｔ⁃ｔｒａｎｓｅｃｔｉｏｎ， ＡＣＬＴ）制作 ＫＯＡ 模型，抽屉试验检测是否到位，造 模操作后，驱赶大鼠每天强制活动 ３０ ｍｉｎ 以诱导 ＫＯＡ 模型，造模 ４ 周后大鼠出现跛行、跳跃动作，且苏木素－ 伊红（ＨＥ）染色出现软骨表层缺损变形和炎细胞浸润确认造模成功，造模成功后，大鼠随机分为模型组（ ｎ ＝ ８）、塞来昔布组（ｎ ＝ ８）和益肾逐瘀通络汤组（ ｎ ＝ ８）。 各组大鼠给予生理盐水或药物灌胃干预，其中，假手术 组和模型组大鼠灌胃 １０ ｍＬ ／ ｋｇ 的生理盐水，塞来昔布组大鼠灌胃 １２ ｍｇ ／ ｋｇ 的塞来昔布水溶液，益肾逐瘀通 络汤组大鼠灌胃 ５. ４ ｇ ／ ｋｇ 的中药水煎液，每天 １ 次，连续 ８ 周。 干预完成后，麻醉大鼠，腹主动脉采血分离血 清，分离膝关节，每组取 ３ 份膝关节固定于多聚甲醛，其他分离关节软骨组织备用。 使用 ＨＥ、番红固绿染色观 察大鼠关节面软骨病理改变；ｍｉｃｒｏ⁃ＣＴ 分析骨微结构；ＥＬＩＳＡ 检测血清白细胞介素（ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ，ＩＬ）⁃１β、ＩＬ⁃１８ 的蛋白表达量；逆转录定量 ＰＣＲ（ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｒｅａｌ⁃ｔｉｍｅ ＰＣＲ，ＲＴ⁃ｑＰＣＲ）检测细胞焦亡和铁 死亡相关基因 ＮＬＲＰ３、ＡＳＣ、Ｃａｓｐａｓｅ⁃１、ＧＳＤＭＤ、ＩＬ⁃１β、ＩＬ⁃１８、ＡＣＳＬ⁃４、ＦＴＨ⁃１、ＧＰＸ⁃４ 和 ＣＯＸ⁃２ 的 ｍＲＮＡ 相对表 达水平。 免疫组化检测 ＮＬＲＰ３、Ｃａｓｐａｓｅ⁃１、ＣＯＸ⁃２ 蛋白表达情况。

结果 与假手术组比较，模型组大鼠软骨组 织表层缺损变形，整体各层细胞排列紊乱，番红固绿染色丢失较多，骨小梁稀疏、分布紊乱；血清炎症因子 ＩＬ⁃ １β 和 ＩＬ⁃１８ 升高（Ｐ＜０. ０１）；软骨组织 ＮＬＲＰ３、ＡＳＣ、Ｃａｓｐａｓｅ⁃１、ＧＳＤＭＤ、ＩＬ⁃１β、ＩＬ⁃１８、ＡＣＳＬ⁃４ 和 ＣＯＸ⁃２ ｍＲＮＡ 表 达量均升高（均 Ｐ＜０. ０１），ＦＴＨ⁃１ 和 ＧＰＸ⁃４ ｍＲＮＡ 表达量均下降（Ｐ＜０. ０１）。 与模型组比较，塞来昔布和益肾 逐瘀通络汤组大鼠软骨表面较完整且平滑，细胞数量显著增多，番红固绿染色丢失较少，骨小梁致密、骨皮质 丰厚，骨微结构均改善；血清炎性因子 ＩＬ⁃１β 和 ＩＬ⁃１８ 表达量下降（Ｐ＜０. ０１）；软骨组织 ＮＬＲＰ３（Ｐ＜０. ０１，Ｐ＜ ０. ０５）、ＡＳＣ、Ｃａｓｐａｓｅ⁃１、ＧＳＤＭＤ、ＩＬ⁃１β 和 ＩＬ⁃１８、ＡＣＳＬ⁃４ 和 ＣＯＸ⁃２ ｍＲＮＡ（均 Ｐ＜０. ０１）ｍＲＮＡ 表达量下降；ＦＴＨ⁃１ 和 ＧＰＸ⁃４ ｍＲＮＡ 相对表达量显著升高（Ｐ＜０. ０１）。

结论 益肾逐瘀通络汤可通过抑制 ＫＯＡ 大鼠软骨细胞焦 亡和铁死亡，降低血清 ＩＬ⁃１β、ＩＬ⁃１８ 的水平，改善骨微结构，治疗 ＫＯＡ。

阅读原文：益肾逐瘀通络汤对膝骨关节炎大鼠软骨细胞焦亡和铁死亡的影响.pdf