目的 探讨 miR-518a-5p / 组蛋白去乙酰酶 6( histone deacetylase 6,HDAC6) 轴参与卵巢癌 (ovarian cancer,OC)SKOV3 细胞 DNA 氧化损伤的作用机制。

方法 实时荧光定量逆转录 PCR(qRT-PCR)检 测 OC 组织和不同癌细胞(A2780、SKOV3、CAOV3)中 miR-518a-5p、HDAC6 mRNA 表达,将 SKOV3 细胞分为 Control 组、miR-NC 组、miR-518a-5p mimics 组、miR-518a-5p mimics + pcDNA-NC 组、miR-518a-5p mimics + pcHDAC6 组。 利用平板克隆与 Hoechst33258 染色分析细胞增殖与凋亡情况;免疫荧光法检测磷酸化组蛋白 H2AX(phosphorylated histone H2AX,γ-H2AX)表达;流式细胞仪分析活性氧( reactive oxygen species,ROS)水 平;Western blot 法分析 HDAC6、Bcl-2 相关 X 蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)、B 淋巴细胞瘤- 2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)表达;双荧光素酶分析 miR-518a-5p 与 HDAC6 的调节关系。 通过异种移植肿瘤模型研究 miR-518a-5p 对 OC 细胞 DNA 氧化损伤的影响及机制。

结果 OC 组织和 A2780、SKOV3、CAOV3 细胞中 miR- 518a-5p 表达降低,HDAC6 表达升高(P<0. 001);SKOV3 细胞中 miR-518a-5p 表达最低,HDAC6 表达最高,故 选择 SKOV3 细胞进行后续实验。 与 miR-NC 组比较,miR-518a-5p mimics 组 miR-518a-5p 表达、细胞凋亡率、γ- H2AX 阳性细胞数、ROS 相对荧光强度、Bax 表达升高,HDAC6 mRNA 及蛋白表达、Bcl-2 表达、集落形成数降 低(P<0. 001);与 miR-518a-5p mimics+pcDNA-NC 组比较,miR-518a-5p mimics+pc-HDAC6 组 HDAC6 mRNA 及 蛋白表达、集落形成数、Bcl-2 表达升高,细胞凋亡率、γ-H2AX 阳性细胞数、ROS 相对荧光强度、Bax 表达降低 (P<0. 001);HDAC6 与 miR-518a-5p 存在靶向调控关系。 体内实验结果显示,过表达 miR-518a-5p 降低移植瘤 体积、重量及肿瘤组织 HDAC6 蛋白表达,增高 γ-H2AX 阳性表达(P<0. 001);在过表达 miR-518a-5p 的基础上 上调 HDAC6 表达后,移植瘤体积、重量及 HDAC6 蛋白表达升高,γ-H2AX 阳性表达下降( P< 0. 05)。

结论 OC 组织和细胞中 miR-518a-5p 表达降低,HDAC6 表达升高,过表达 miR-518a-5p 可通过抑制 HDAC6 表达,诱 导 SKOV3 细胞 DNA 氧化损伤,进而抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。

阅读原文：miR-518a-5p╱HDAC6轴参与卵巢癌SKOV3细胞DNA氧化损伤的作用机制.pdf