番泻叶加冰醋酸灌肠法致溃疡性结肠炎脾虚证模型
1.造模材料 动物:短毛杂色豚鼠,体重300~400g;药物:番泻叶,用开水浸泡24h,制成20%良剂;冰醋酸,用蒸馏水配成5%浓度;戊巴比妥钠;肥皂。
2.造模方法
(1)取豚鼠禁食不禁水17h,按15ml/100g体重的容积灌服番泻叶浸剂,每天1次。灌服3天后,禁食不禁水36h、用戊巴比妥钠25mg/kg体重腹腔注射麻醉,0.5%的肥皂水灌肠,20min后,肛门注入5%冰醋酸0.1ml。动物苏醒开始正常饲养,次日开始继续灌服番泻叶2天,造模第8天处死。
(2)根据“酒,痛饮则伤神耗血,损胃亡精”,“味过于酸……脾气乃绝”之理,采用酒、醋造成脾虚模型。其方法是实验第一日用50%白酒2ml给大鼠灌胃,第二日以后每日用食醋2ml灌胃,共7天。
3.造模原理 食醋法制备脾胃虚寒动物模型,首先是结合了中医关于虚证形成的理论,在造模时间上更充分。而过食酸味可致脾虚的理论早在《黄帝内经》中就有论述。《素问·生气通天论》日:“味过于酸,肝气以津,脾气乃绝”,认为饮食过酸,肝木旺盛,克伐脾土,可致脾气虚衰;《素问·刺法论》关于“欲令脾实,食勿太酸”的训诫也表明了饮食偏酸有损伤脾胃的可能。
苦寒药番泻叶造脾虚模型是根据李东垣“苦寒之药损其脾胃”(《脾胃论》)的理论而来的。服番泻叶后,苦寒伤中,中气虚弱,脾失健运,胃失和降,使清气不升,浊气不降。《内经》有言,“清气在下,则生飨泻;浊气在上,则生腹胀”,故可见腹胀,泄泻,甚至脱肛;胃不受纳,可见食少纳呆;脾失健运,不能输布水谷精微于全身,四肢肌肉及清窍失养,皮毛失煦。
4.造模后一般变化 动物在灌服番泻叶3天后陆续出现便溏、纳呆、消瘦、拱背、少动、毛失光泽、精神萎靡等脾虚症状。自肛门注入冰醋酸后2~3天出现黏液便,有的带血性分泌物,有的出现腹胀。造型第8天处死动物,取出近肛门端10cm左右的结肠段,纵行切开,肉眼观察,可见肠黏膜大面积水肿,不同大小的溃疡灶。
5.造模后生化变化 正常对照组用药前、用药后的体重(g)分别是334.7±9.6,342.2±11.2,差值为+7.5±1.0;模型组分别为335.1±11.5、301.3±12.8,差值为-33.8±1.1。说明造模成功。
6.造模后病理变化 病理切片可见黏膜、黏膜下层水肿,充血,炎性细胞浸润,溃疡形成。结肠黏膜弥漫性充血水肿,炎性细胞浸润,出现糜烂,严重者可见溃疡形成。
7.注意事项 实验时选用的药材品种、产地和动物的种系均要求一致;番泻叶的煎煮时间要有控制,否则它的致脾虚的成分有损失。