目的 观察 EV71 型肠道病毒(Enterovirus 71, EV71)诱导骨骼肌损伤的影响,探讨 caspase-1/ IL-1β 信号通路在 EV71 诱导的骨骼肌损伤中的作用机制。

方法 将 1 日龄 BALB/ c 乳鼠随机分为 3 组,正常 对照(normal control,NC)组 60 只、EV71 感染组 60 只、caspase-1 抑制剂(EV71+VX-765)组 15 只。 正常对照组 及 EV71 感染组各随机分为 5 d、7 d、10 d、14 d 4 个亚组,每亚组 15 只。 将 25 mL / kg 的 EV71 病毒液,腹腔注 射到 1 日龄 BALB/ c 乳鼠体内,连续注射 3 d,建立 EV71 感染组模型。 在病毒接种后 6 h 腹腔注射 caspase-1 抑制剂 VX-765(20 mg / kg),连续 10 d 接种,直至取材,建立 caspase-1 抑制剂组模型。 同时,正常对照组等体 积注射含有 5% DMSO+ 10% PEG300 的生理盐水,6 h 后注射 2% 的细胞维持液。 造模成功后,记录各组 BALB/ c 乳鼠体质量和疾病评分,苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察骨骼肌病理损伤,蛋白免疫印 迹(Western blot)和免疫荧光( immunofluorescence,IF) 检测肠道病毒 71 型病毒蛋白 1 ( Enterovirus 71 viral protein 1, EV71 VP-1)、前体胱天蛋白酶-1(pro-cysteine-dependent aspartate-specific protease-1, pro-caspase-1)、 切割型胱天蛋白酶-1(cleaved cysteine-dependent aspartate-specific protease-1, cleaved-caspase-1)、白细胞介素- 1β(interleukin-1 beta, IL-1β)、α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin, α-SMA)、I 型胶原蛋白(Collagen type I, Collagen I)蛋白的表达。

结果 与同时间点正常对照组相比,EV71 感染组乳鼠体质量减轻,疾病评分 升高;EV71 感染组乳鼠骨骼肌组织 HE 染色可见炎性细胞大量浸润、肌束断裂溶解,肌肉组织横截面积减少; Western blot 结果显示,与正常对照组相比,EV71 感染组乳鼠 5 d、7 d、10 d 骨骼肌组织匀浆中 EV71 VP-1、IL- 1β、α-SMA 和 Collagen I 水平均明显升高(P<0. 001);与 EV71 感染组相比,EV71+VX-765 组乳鼠体质量升高 及临床疾病评分降低(P<0. 01),Western blot 与免疫荧光结果一致显示,caspase-1 抑制剂可以显著降低 EV71 感染组乳鼠骨骼肌组织匀浆中 EV71 VP-1 蛋白表达(P<0. 01),下调 pro-caspase-1、cleaved-caspase-1、IL-1β 和 Collagen I 蛋白水平(P< 0. 001),抑制 caspase-1 减弱了 EV71 病毒对 BALB/ c 乳鼠骨骼肌损伤作用。

结论 EV71 可能通过激活 caspase-1/ IL-1 信号通路诱导骨骼肌损伤。

阅读原文：EV71通过Caspase-1╱IL-1β信号通路诱导BALB╱c乳鼠骨骼肌损伤.pdf