劳倦过度加饮食失节加苦寒泻下法致脾虚证模型(脾阳虚)
1.造模材料 动物:大鼠,SD纯系,雄性,体重约170g;药物:甘蓝,猪脂,番泻叶;跑步机。
2.造模方法
(1)取造模动物,单日喂饲甘蓝10~15g/只,上跑步机上跑步5min/只,双日猪脂2ml加番泻叶0.8g/只灌胃,造型15天,第1天至第5天不加番泻叶。
(2)番泻叶加劳倦过度组(BC组),施游泳2~5min,以身体下沉为度,每日1次,且施100%番泻叶煎剂0.5ml/(只),造模15天。
(3)周奇志采用先禁食2天,此后间日每只喂饱10g颗粒饲料以维持半饥饿状态,并于实验第3天以50%乙醇1ml/只灌胃1次,第4、第5天以食醋1ml/只,各灌胃1次,第6~19天以大黄煎液5ml/只灌胃1次。
(4)模型组采用慢性束缚应激+过度疲劳+饮食失节法造模,合格大鼠于每天上午8:00时置于束缚盒中限制3小时,下午2:00时置于盛有温水(22℃的大塑料桶中游泳10min,隔日喂食,连续3周。
3.造模原理 关于劳倦病因,张介宾云:“脾胃之伤于外者,唯劳倦最能伤脾,脾伤则表里相通,而胃受其困者为甚。”
用苦寒药番泻叶造脾虚模型是根据李东垣“苦寒之药损其脾胃”(《脾胃论》)的理论而来的。服番泻叶后,苦寒伤中,中气虚弱,脾失健运,胃失和降,使清气不升,浊气不降。《内经》有言,“清气在下,则生飨泻;浊气在上,则生腹胀”,故可见腹胀,泄泻,甚至脱肛;胃不受纳,可见食少纳呆;脾失健运,不能输布水谷精微于全身,四肢肌肉及清窍失养,皮毛失煦。
4.造模后一般变化 造模第3天开始,出现体重逐日下降,少动,大便时软时干。增加番泻叶第3天开始出现腹泻,有时可见黏液性便,肛门周围有污物,体重下降明显,体温下降,被毛无泽,纳呆。其症状体征包括脾虚与气虚,如食量减少,大便稀溏,或便软,或腹泻,体重增长缓慢或下降,或消瘦,体温下降、纳呆、泄泻,畏寒蜷缩,耐寒力低,萎靡不振,倦怠少动,眯眼,拱背,扎堆,毛色枯黄无泽,耳尾色淡等症状。
5.造模后生化变化 血丙二醛增加显著,血谷胱甘肽过氧化物(GSH-Px)、Cu、Zn-超氧化物歧化酶(Cu、Zn-SOD)活性降低,过氧化氢酶(CAT)含量降低明显。
6.造模后病理变化
(1)小肠的病理变化:小肠超微结构见微绒毛排列不整齐,数目减少,细胞间紧密连接模糊不清,绒毛下端吞饮液泡增加。线粒体肿胀,基质均匀变浅,嵴消失,有的内外膜破裂,基质溢出。细胞核间隙宽度不等,常染色体丰富,细胞器相对减少。
(2)肝脏的病理变化:肝脏线粒体肿胀,基质变浅,嵴数目减少或消失,有的内外膜破裂,细胞内粗、滑面内质网减少,可见其扩张或囊泡化,糖原颗粒增加。
(3)骨骼肌的病理变化:骨骼肌z线排列不整齐,肌原纤维排列疏松,数目减少,线粒体肿胀,基质变空。
7.注意事项 100%精炼猪脂易冻结,需温烊后灌胃,要掌握其适当温度;除灌胃外,对各组小鼠均提供水及硬饲料,自由进食。灌胃技术需熟练,否则会造成小鼠肺损伤而影响实验结果。