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无菌小鼠相关知识介绍

2018年03月26日 浏览量: 评论(0) 来源:南京大学-南京生物医药研究院 作者:NBRI 责任编辑:admin
摘要:众所周知,实验动物按微生物控制的程度可分为五类:无菌动物(GF)、悉生动物(GN)、无特定病原体动物(SPF)、清洁动物(CL) 和普通动物(CV),无菌动物作为微生物控制程度最高等级,培育和维持也有相当大的难度,在进行了一系列的尝试后,NBRI在无菌鼠培育方面也有所突破。

众所周知,实验动物按微生物控制的程度可分为五类:无菌动物(GF)、悉生动物(GN)、无特定病原体动物(SPF)、清洁动物(CL) 和普通动物(CV),无菌动物作为微生物控制程度最高等级,培育和维持也有相当大的难度,在进行了一系列的尝试后,NBRI在无菌鼠培育方面也有所突破。

首先为大家详细介绍无菌动物,它最大的特点在“无菌”二字,这里“菌”主要是指细菌,而严格来说,还包括真菌、立克次氏体、支原体和病毒等微生物及各种寄生虫。但“无”不是绝对的,不过是根据现有的科学知识和检查方法在一定时期内不能检出已知的微生物和寄生虫而已。

无菌小鼠的外观和普通动物外观上是相同的,但是其机能、结构和普通鼠有一些的不同,主要体现在以下几个方面:首先是肠道结构,对无菌小鼠进行解剖,能观察到最明显特点是盲肠比普通小鼠大5-6倍,观察其肠道肌层,也会发现它的肠道肌层很薄、肠粘膜绒毛有增多现象。此外,无菌鼠的循环系统、血液系统和网状内皮系统也会发生变化,和普通小鼠相比,无菌鼠的心脏相对较小,血液中的白细胞数增加且相对恒定,脾脏缩小,无三级滤泡,网状内皮细胞功能降低。由于一直生活在无菌的环境,它们对微生物的感染异常敏感,也更容易出现污染。

无菌小鼠在微生物、免疫学、肿瘤、营养代谢等各类研究中有着重要的作用和应用前景,因此NBRI也开始着手培育自己的无菌小鼠。无菌小鼠的培育过程非常困难和繁琐,在培育之前,我们查阅了很多文献资料,基于胎盘屏障我们确定了无菌小鼠培育方法:①在有无菌小鼠种群的情况下,孕鼠剖腹产取子宫,子宫经无菌处理转入无菌环境中,再从子宫中剖出小仔由无菌母鼠代乳,进而获得无菌后代。②在没有无菌小鼠种群的情况下,剖腹产获得的小仔只能在无菌环境中采用人工授乳的方式进行培育。我们从零开始,选择了人工授乳来培育无菌小鼠。

为了增加培育的成功率,我们先用ICR小仔在普通环境中练习人工授乳,期间遇到的主要难点在于人工乳的配方、授乳针制作、授乳操作、温湿度维持等等,几批次的尝试之后,我们喂养成活了几只小鼠且配繁生仔,证明我们“奶爸”当的还是可以的。

前期探索完毕后我们开始正式培育。为了能保证无菌环境,我们使用软塑正压隔离器作为无菌小鼠的“家”。在小仔“入住”之前,我们要对隔离器进行彻底地消毒,我们使用的是过氧化氢熏蒸和过氧乙酸喷雾灭菌,然后在隔离器内为小仔准备好吃的,喝的,用的。当然,所有进入隔离器物料必须保证是无菌的,为此我们制定了严格的灭菌操作规范和隔离器操作规范。基于先期人工授乳探索的经验及操作熟练度的增加,最终我们分两批次喂养成活两雄五雌ICR小鼠。我们采集了小鼠粪便、隔离器棉拭子检测均并未发现微生物和寄生虫,为繁育我们自己的无菌鼠种群打下基础。当然后面要将其维持在无菌状态,仍然困难重重,路漫漫其修远兮,吾将上下而求索。

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